荧光免疫层析试剂技术要点及生产工艺流程

荧光免疫层析试剂技术要点及生产工艺流程

定量技术部：张赛

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荧光免疫层析技术平台

荧光免疫层析试剂的制备荧光免疫层析技术要点荧光免疫层析试剂生产工艺流程

荧光免疫层析技术平台

荧光免疫层析技术平台 定量试剂开发程序阶段划分开题

工作内容预实验&开发计划书确定工艺和反应体系

备注立项评审

阶段1

实验室研究

预临床实验( 100例)稳定性验证(破坏试验)

转化评审

阶段2阶段3结题

生产转化临床验证

三批试生产(3000人份/批)临床验证( 200例)结项评审

荧光免疫层析技术平台 与金标免疫层析法的区别：标记物金标免疫层析金颗粒荧光素

国内首家荧光免疫层析

显色光信号

荧光免疫层析技术平台 LFIA Lateral Flow Immunochromatographic Assay stripControl line对照线

横向流动的免疫诊断试剂条Test line检测线

Sample prefilter pad样品垫

Conjugate pad结合垫 Plastic backing塑料衬垫

Absorbent pad吸水垫 Cellulose nitrate membrane硝酸纤维素膜

荧光免疫层析技术平台 反应模式检测抗体：间接法双抗原夹心法检测抗原：双抗体夹心法——受样本干扰最多检测小分子抗原：竞争法

荧光免疫层析技术平台 检测原理

图谱检测

发射光 (525nm)光源

(蓝光)

激发光 (470nm)

光学系统

荧光免疫层析技术平台 定量方法

以荧光仪检测的T/C比值作为指标进行定标和计算，消除试条间/批内/操作等方面偏差

技术先进性：快速:免疫层析技术----操作简便准确:信号比值定量----降低偏差灵敏:荧光标记技术----信号放大

荧光免疫层析试剂的制备

荧光免疫层析试剂的制备 荧光标记物：荧光微球(Fluorescence Microparticle)粒径：300~500nm(适用于常规免疫层析)

表面修饰基团：-COOH(抗体标记为主)/ -NH3···标记方式：蛋白(Ab)与荧光微球通过共价键结合

荧光标记结合物：以一定稀释比喷涂于样品垫或包被膜上——标记垫、标记膜

荧光免疫层析试剂的制备 标记垫的制备荧光标记物最佳浓度

样品垫buffer玻璃纤维/聚酯纤维喷垫

离子强度，pH值，蛋白保护剂，聚合物，表面活性剂，阻断剂等

干燥24h,湿度<20%

干燥

保存备用

温度4-30℃湿度<20%

荧光免疫层析试剂的制备 包被膜的制备Ab/Ag最佳浓度

包被buffer NC膜孔径喷膜离子强度，pH值，蛋白保护剂

干燥72-144h湿度<20%

干燥

保存备用

温度4-30℃湿度<20%

荧光免疫层析技术要点

荧光免疫层析技术要点 膜的筛选：(1)厂家：Sartorius 95/135 Millipore 90/140

(2)特性：小孔径膜——反应更充分，灵敏度(低浓度)更高大孔

径膜——反应更快速，线性水平(高浓度)更佳与不同粒径胶乳协同筛选★保存条件：原料膜：15~30℃/RH 45~65%包被膜：15~30℃<RH 15%

荧光免疫层析技术要点