黄芪多糖对过氧化氢诱导大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用

虫国中医眼科杂志 2 0 l 4年 8月第 2 4卷第 4期

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论著：实验研究

黄芪多糖对过氧化氢诱导大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用司俊康郭俊国 唐凯杜宇翔郭大东 z王兴荣 3

【摘要】目的用。方法

观察黄芪多糖( A P S )对过氧化氢诱导的大鼠视网膜神经节细胞( R G C )氧化损伤的保护作

将 RG C一 5细胞分为正常对照组、阴性对照组、过氧化氢损伤组、黄芪多糖干预组。正常对照组不做

处理，阴性对照组和过氧化氢损伤组分别加入 1 0 0 0￣ g/ l的黄芪多糖和 1 m 0 0￣ mo l/ L的过氧化氢 .黄芪多糖干预组加入不同浓度 ( 1 0 0 0￣ g/ l、 m 5 0 0￣ g/ ml、 2 5 0￣ g/ 1) m黄芪多糖后加入 1 0 0 t x m o l/ L的过氧化氢。用倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化； M1 T r法检测细胞活性； D A P I染色观察细胞核形态学变化：实时细胞电子传感器( R T— C E S )分析系统记录细胞生长状态。结果倒置相差显微镜下正常 R G C一 5细胞呈扁平梭形，边缘

清晰，有较短突起，过氧化氢损伤组细胞皱缩，细胞密度减低，轴突缩短，其他各组细胞形态未见明显改变。MT I ':各浓度黄芪多糖干预组的细胞活性均较过氧化氢损伤组升高，差异具有统计学意义 ( P< 0 . 0 1 )。D A P I染色：过氧化氢处理后 R G C一 5细胞核可见染色质凝聚，边缘化；黄芪多糖干预后仅少量细胞出现染色质凝聚现

象。 R T— C E S:与正常对照组相比，过氧化氢损伤组细胞生长受到抑制，其余各组细胞生长曲线基本正常。结论黄芪多糖可以抑制过氧化氢诱导的大鼠 R G C凋亡 .这为黄芪类药物治疗糖尿病视网膜病变提供了一定的实验基础。

【关键词】黄芪多糖；氧化损伤；视网膜神经节细胞：凋亡中图分类号： R 2 8 5 . 5; R 7 7 4 . 1 文献标识码： A 文章编号： 1 0 0 2— 4 3 7 9 ( 2 0 1 4 ) 0 4— 0 2 3 5— 0 5

Pr o t e c t i v e e f f e c t o f a s t r a g a l u s p o l y s a c c h a r i d e a g a

i n s t H2 02 - i n d u c e d o x i d a t i v e d a ma g e o n r a t r e t i n a l

g a n g l i o n c e l l s S/ J u n k a n g, G U O J u n g u o, T A NG Ka i, e t a 1 . S h a n d o n g U n i v e r s i t y o j T r a d i t i o n a l C h i n e s e Me d i c i n e J i—n a n 2 5 0 0 0 2, C h i n a

【 Ab s t r a c t】 O B J E CT I VE T o o b s e r v e t h e p r o t e c t i v e e f f e c t o f a s t r a g a l u s p o l y s a c c h a r i d e ( A P S ) a g a i n s t H 2 0 2一i n d u c e d o x i d a t i v e d a m a g e o n r a t r e t i n a l g a n g l i o n c e l l s ( R G C ) . ME T HOD S C u l t u r e d RG C一 5 c e l l s w e r e d i v i d e d r a n d o ml y i n t o 4 g r o u p s, i n c l u d i n g n o r ma l c o n t r o l ro g u p ( G r o u p A), n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p ( G r o u p B ), H 2 0 2 i n j u r yg r o u p ( G r o u p C ) a n d H 2 0 2+A P S ro g u p ( G r o u p D) . G r o u p A r e c e i v e d n o t r e a t me n t, G r o u p B w a s t r e a t e d w i t h 1 0 0 0ml AP S, Gr o u p C w a s t r e a t e d w i t h 1 0 0 p￣ mo l/ L H2 02, G r o u p D w a s t r e a t e d wi t h d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f AP S

( 1 0 0 0￣ g/ ml, 5 0 0￣ g/ m l, 2 5 0￣ g/ 1 )a m n d t h e n t r e a t e d w i t h 1 0 0 l u, mo l/ L H

2 0 2 . T h e c e l l u l a r mo r p h o l o g y w a s o b—s e r v e d b y i n v e r t e d p h a s e c o n ra t s t mi c r o s c o p e; t h e c e l l v i a b i l i t y wa s me a s u r e d u s i n g MT I" a s s a y a n d a p o p t o s i s wa s e -

v lu a a t e d u s i n g DAP I s t a i n i n g; t h e c e l l p r o l i f e r a t i o n wa s d y n a mi c ll a y mo n i t o r e d u s i n g t h e r e a l - t i me c e l l e l e c t r o n i c

s e n s i n g ( R T - C E S )s y s t e m. RE S U L T S N o r m l a R G C - 5 c e l l s w e r e s p i n d l e o r p o l y g o n a l, c e l l b o r d e r s w e r e c l e a l r ya n d h a d s h o r t a x o n s . C e i l s i n Gr o u p C we r e s p a r s e, s h r i n k a g e a n d t h e xo a n s we r e s h o te r r t h a n n o r ma l c e l l s . Mq T a s—

s a y: he T c e l l v i a b i l i t y i n G r o u p D w a s h i g h e r t h a n G r o u p C, a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s i g n i i f c a n t ( P< 0 . 0 1 ) . D A P I s t a i n -i n g r e v e le a d t h a t c h a r a c t e r i s t i c a p o p t o t i c c h a n g e s, s u c h a s c h r o ma t i n c o n d e n s a t i o n, c o n v o l u t e d n u c l e i wi t h c a v—基金项目：山东省自然科学基金 ( Z R 2 0 0 9 C M1 3 5 );山东省中医药科技发展计划 ( 2 0 1 1 - 1 3 0 )

i t a t i o n

s,f r a g me n t a t i o n o f t h e n u c l e u s a n d a p o p t o t i c b o d i e s a p p e a r e d i n RGC- 5 c e l l s i n Gr o u p C. T h e r e wa s a l mo s t n o e v i d e n c e o f a p o p t o s i s i n G r o u p D. RT— C E S:

作者单位： 1山东中医药大学 ( 2 0 1 2级眼科学在读硕士研究生 ),济南2 5 o ( ) o 2

2山东中医药大学眼科研究所3山东中医药大学附属眼科医院

C e l l ro g w t h i n Gr o u p C wa s s u p p r e s s e d,w h i l e o t h e rro g u p s h a s n o r ma l c e l l g r o th w c u ve r . CONCLUS I ONS

通讯作者：王兴荣。 E— ma i l: s e m x r w@1 6 3 . c o n r