巴斯德毕赤酵母高效表达外源蛋白的策略(2)

来源：网络收集时间：2026-10-01

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诱导时能够被消耗殆尽。用甲醇诱导外源蛋白表达，在诱利则导期间往培养基中补加甲醇，以弥补甲醇的消耗和蒸发。两用

步法 (用甘油培养使细胞达到一定的浓度，加甲醇诱导 )先再和联合生长培养的方法 (rwt—soi e,早期加人甲醇 go hasc td在 a诱导 )诱导外源蛋白的表达都有成功的报道，在一般两步来现法来诱导外源蛋白的表达。而 O ah (9 8的研究证明 h si 1 9 ) go t—s cae诱导甲醇酵母高水平表达外源基因的很 rw has i d是 o t好方法，比普通方法高出 1㈣。几年也有用甘油、油一 0倍近甘甲醇、醇的的培养方式，可以改善酵母菌培养的代谢条甲这件，短诱导期，得更高的蛋白产出率，即使加入很低浓缩获但度的甘油也会抑制外源蛋白的合成，在诱导期，而只加入甲醇并随时监测发酵液中甲醇的浓度，获得更高的产量。“” 可。。

表达菌株的筛选应以表达蛋白量为唯一标准。4载体和宿主的选择

用巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白时有多种表达载体可供选择。有胞内表达的，有分泌表达的；有组成性表达的，既又既又有诱导性表达的；泌表达

又有多种表达信号肽可以选择。分

可以根据具体情况选择高表达载体。外源蛋白的表达也受宿主菌遗传特性和生长特性等的影响，比如说，果外源蛋白对如蛋白酶敏感，用蛋白酶缺陷的受体菌可减弱蛋白酶的作用。使转化子的表型对外源蛋白的表达也有影响，般说来，白胞一蛋

内表达时，先考虑用 Mu。型；于分泌表达， t优 t表对 Mu和 M u+可使用。在高生物量的发酵中， t生长更快，之 t都 Mu较 M u+于提高外源蛋白的表达量更有效。有时 M u菌株虽 t对 t 然在诱导阶段生长缓慢，外源蛋白的表达反而更高，有利但更于蛋白的正确折叠， P P I表达在 Mu。株中较高也如 eT的 t菌可以在不改变现有表达载体及宿主菌的前提下，过从通

以甲醇作为诱导剂不但可以诱导 AOX启动子驱动外源蛋白的表达，可以诱导蛋白酶的表达，也因此甲醇添加量对外源蛋白的表达可以产生影响，时，同由于培养条件和转化子表型不同，加甲醇的量也有所不同。添甲醇含量可根据甲醇检测器或气相色谱来测，甲醇检测器测量时会受乙醇和其它简单碳氢有机物的影响，气相色谱测量得出的数据较准确。导时间用诱·5‘

生物学酵母表达

维普资讯

海峡药学也是影响因素之一 .导时间应该在 10诱 5h左右，源基因的外表达才能达到最高，有些菌表达时需要诱导 2 0而 0 h以上 .过

20 0 7年

第 1 9卷第 2期

p值 .此低 p不会影响其生长，止目的蛋白降解。此 H因 H防外，可通过共表达蛋白酶抑制物来抑制蛋白酶活性，少目的减

短的时间 (d表达量很低，长的时间外源蛋白的降解增加， 3)过因此寻求一个最佳产量时间比就特别重要。邱荣德 ( 9 9的 19 )

蛋白降解；将目的蛋白与一种在 P ps r可 . at i稳定的蛋白 o s中伴侣融合表达，过改变目的蛋白的性质来提高稳定性；通也可尝试将目的蛋白连上一个过氧化物酶体靶向信号 ( eo i ma agt gin1P S,其被分拣转运人过氧化 p rx

s l rei s a. T )使 o t n g

报道认为，果用两步法来诱导外源蛋白的表达，诱导时的如则起始 p可能是毕赤酵母高效表达重组蛋白的关键之一， H通过改变诱导时的 p值，使表达量提高 5以上“。在培 H可 0”养基中添加特殊的营养物质，提高一些特殊蛋白的表达水能平 .添加限制氨基酸以及表达含有金属的酶时在培养基中如

物酶体贮存起来，受蛋白酶降解，可减少对宿主细胞的毒免还害作用 n ¨" ¨ 。随着毕赤酵母表达体系的日益成熟， rI一、h象 h L 2 rGH、人

添加金属元素。” 。5 2通过提高菌株的生物密度来提高外源蛋白表达量采 .

血清蛋白等许多生物制品已在该系统成功表达，要得到高但表达，生产工业化，得高利益，有一段很长的路要走。使获还参考文献 (3翔 .克克，育阳， 1赵霍李毕赤酵母的密码子用法分析 (3 J .生物工程学报，0 0 1 ( ) 3 8 3 1 2 0 .6 3:O~ 1 .

用不同的培养基配方和不同的发酵参数，过提高细胞的绝通对总数来提高外源蛋白的产量。影响 P psoi生长的外界 .atr s

因素主要包括：1培养基组成。 ()目前主要有 B Y、 B MG F S2种培养基可用于培养 P psoi .atr。但由于 B Y既含有磷酸缓 s MG冲液又含蛋白胨和酵母提取物，因而菌株生长更好，大增加大了生物量，表达量也相应大大提高。如在表达 mE F时，使 G在

( 3秀玉，恂 .坚 .毕赤氏酵母 P 2戴王周 AOX 2突变化序列分析 (3 J.微生物学报，9 93 ( )5 9 5 1 1 9, 96:5~ 6 .

(3东宋，宋平 .敏 .源蛋白在巴氏毕赤酵母中高效表达的策 3聂梁李外略 (3 J.吉首大学学报 (自然科学版 )2 0 .2 3:O ., 01 2 ( )4~4[ 4]Oh s i a hR,M o hiu E,Ka s i Y. g lv l x rsin f h c z ki mo ht a Hih— e e p eso o t e eme h n li d cb e b t· lc o i a e g n y p r u in c lu e o t a o·n u

i l e a- a t sd s e e b e f s u t r f - ga o r c m bna tPih a p t rsu i g a s a n c r mi m b a e f s e o i n c i a o i sn h ke e a c me r n l k s a

B Y培养基中单拷贝转化子表达量为 2 g MG 0 g·L 而在不 _,含蛋白胨和酵母提取物的基本培养基中表达量少于 lg· u L。但 Y _, NB价格相对较高，以工业上用 F S是个不错的所 B选择。白胨和酵母提取物中几乎不含大分子蛋白质，有分蛋只

[] J u n l f eme tt n& Bo n ie r g 1 9, 6 1: 4 J . o r a o r nai F o i gn ei, 9 8 8 ( ) 4~ e n4 . 8

子量低于 3 0Da的小分子多肽，此对于大分子外源蛋白 00因的分离纯化不会造成不便。 2诱导前菌体 O值。 .atr () D P ps i os

[5] Viat F, Hu en AS, B c ma o l te l s i a h n TT . p e in lv l o Ex rs o e e fh t r lg u r t i s n Pih a Pa t rs s n l e c d y ls e e oo o s p o e n i c i s o i i i fu n e b fa k

中蛋白表达分 2阶段：是生长阶段，含甘油的培养基培个一在养菌体；是诱导表达阶段，入甲醇到培养基中诱导表达。二加一

d s n J . p co il i e h o 2 0, 5 4 3 4 5 e i[] Ap l g Mi bo Bo c n l 0 1 5: 6~ 6 . r t [6] W o d o M J,Ko v s mie E A. o u to o lr q a ie o Pr d cin f age u ntt s f i

般来说， D。越高，物量越大，总的表达量亦应该越 O值。生则

高.是 O 值越高培养基中氧和营养供给越受限制，且但 D。。而外源蛋白的溶解性、定性、性都会对菌体产生影响。稳毒因此，高密度并不一定意味着高表达。

ioo ial a ee r tii Piha Pat rs b fr ntt n[] s tpc l lb ld p o enn c i s o i y eme ai y o J.

J u n

l fBimoeua o r a o lc lrNM R, 9 9, 3 2 1 9 1 9 o 1 9 1 ( ): 4~ 5 .

( 3 o p Ano c D u u o btl san n r p e ig 7 Th r E D, ju M, a g lsA J S r i o - e rs n e i oac r o s u c f re— a c f r e t to o r c m bn n Pi h a a b n o r e o f d b t h e m n a in f e o i a t c i

5 3防止目的蛋白降解 .

外源蛋白的稳定性直接影响到基

p so i( 3 oe h oo y Letr, 9 9, 1 8 6 9 6 2 at rc J Bit n lg te s 1 9 2 ( ): O~ 7 . c( 3 ah M o hz k Su u A ni c l s rduto n 8 Oh s iR, c iu i E, zki T. mi— aema sp o cin a d ss p r to s s e o s c e o y e e o o u p o e n y e f s n e …… 此处隐藏：3811字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……

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