HE 染色不同试剂和 方法

HE染色1和HE染色2是使用了不同的苏木精配方进行的染色。

两种配方和染色步骤如下。

一、HE染色1

试剂：

Carazzi苏木素染液：苏木精 0.5 g ；甘油 100 mL ；硫酸铝钾 25 g ；蒸馏水 400 mL；碘化钾 0.1 g。将苏木素溶于甘油，硫酸铝钾溶于300ml的蒸馏水中搅拌至完全溶解，混合两液，将碘化钾溶于剩余的100mL蒸馏水，加温到溶解后，混合于上述的混合液中，搅拌均匀，过滤后即可使用，染色时间10min左右。

伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。

染色步骤：

（1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。

（2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。

（3）Carazzi苏木素染色15min，水洗至蓝。

（4）1%盐酸酒精分色3-4s，PBS漂洗3次，每次5min。

（5）伊红染液5min，流水漂洗15min左右。

（6）风干，中性树胶封片后倒置显微镜下观察，拍照。

二、HE染色2

试剂：

苏木素染液：苏木精1g；无水乙醇25mL；硫酸铝钾10g；蒸馏水350mL；碘酸钾0.1g；冰醋酸10mL。 A 液：用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精，摇动即 可溶解。B 液：用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾，摇动或振荡即可溶解。把

A 液和 B 液混合，加入碘酸钾摇动至颜色加深。最后加入10mL冰醋酸，摇动颜色变为深葡萄酒红色。染液配制当日即可应用于染色。酸化液：醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。

伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。

染色步骤：

（1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。

（2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。

( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液 ( 酸化液 ) 数秒。

( 4 ) 苏木精染液 3 ~ 5 m i n，胞核呈橙红色。

( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。

( 6) 盐酸乙醇液分化数秒，颜色再次返红 。

(7) 自来水再次冲洗，返蓝。

( 8) 伊红染液5min，流水漂洗15min左右。