实验五 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色

实验五 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色

一．实验器材

1. 菌种

枯草芽孢杆菌12—18h。金黄色葡萄球菌24h牛肉膏蛋白胨琼脂泄密安培养物等。

1. 溶液和试剂

草酸铵结晶紫染液，齐氏碳酸复红染液，吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用典液，乳酸碳酸棉蓝染液。

2. 仪器和其他用品

酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶，擦镜纸，接种环，接种铲，接种针，镊子，载玻片夹子，载玻片支架，玻璃纸，平皿v型玻璃棒，滴管，解剖针，解剖刀，生理盐水，50%乙醇，20%甘油，高氏1号培养基平板。

二．目的要求

1. 学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术

2. 初步了解细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的形态特征

3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术

三．基本原理

放线菌菌体由基内菌丝，气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采用涂片法以免破坏细胞及菌丝体形态。通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体简单染色进行观察，在插片中首先将灭菌盖玻片插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基接触生长而附着在盖玻片上，取除盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌形态进行观察。

利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。用于染色的染料是一类苯环上带有发色基因的有机化合物。常采用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染料部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色；当细胞处于酸性条件下，所带正电荷增加时，可采用酸性染料染色。

四、操作步骤

（一）细菌制片及简单染色。

1、涂片。

2、干燥。

3、固定。

4、染色。

5、水洗。

6、干燥。

7、镜检。

（二）酵母菌制片及简单染色。

水—碘液浸片法。将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍后，滴加一滴于载破片中央，无菌操作取少许菌体置于染色中混匀，盖上破片后镜剑。

五、思考题。