流式细胞仪检测细胞周期

流式细胞仪细胞周期测定步骤

1）将细胞以1×106接种于60mm培养板，80％汇合后转染。

2）24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素（真核表达载体上的抗性标记）进行培养（该步可选）。

3）48－72小时后用胰酶消化收集细胞，PBS洗两遍，弃上清，加入1ml 70％预冷乙醇中，吹打均匀，4℃固定12小时以上。

4）PBS洗涤去乙醇，1000rpm, 5min，洗两遍。

5）0.5mlPBS重悬细胞，加入PI和 RNaseA至终浓度50µg/ml，37℃ 温浴30 min。

6）用流式细胞仪测定周期。

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

RNaseA：10mg/ml

应用：通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数，可检测细胞的增殖、凋亡。 流式细胞仪细胞周期测定经验:1.在测定细胞周期的时候（以BD公司的Calibur为例），除了设置好获取数据的模版外，另外设置以FL3为横坐标的直方图，测量模式为对数（log），调整放大倍数，使二倍体峰出现在横坐标10*3的位置，就很容易的找到了二倍体峰和细胞周期个时相细胞的分布情况。根据它再调节FL2（线性模式下）的放大倍数，使二倍体峰在10*2的位置即可。