RAW264_7细胞M1_M2亚型的诱导和鉴定(2)

本研究中，前期实验考虑了刺激时间对细胞各指标的影响，但发现一旦干预时间超过16h，各组的细胞数目急剧减少，死亡较多，很难有足够的细胞数进行后续的试验，并且，细胞的生长状态较差，不利于进一步的干预和检测。因此，在正式的试验中选用了12h作为干预时间，这和Jamila K［6］所使用的条件相同。

以往的同类研究中，用于干预的刺激物较多，既往的体外实验证实，单独使用IFN-γ或IFN-γ与LPS联合使用，或图2 不同干预条件下RAW264.7细胞M1型标志物iNOS和

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的IFN-γ与细胞因子如TNF-α和GM-CSF联合使用等均可诱mRNA水平表达。

导巨噬细胞分化成 M1型［8］，而在某些白细胞介素如IL-4、IL-13或TGF-β、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）2.3 IL-4可刺激RAW264.7成为M2亚型：realtime PCR激动剂、维生素D3,CD4+CD25+foxP3+Treg细胞，脂联素等检测及将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳显示三种浓度的IL-4的刺激下亦可诱导巨噬细胞向M2型分化［2,9-11］。本研究中选

刺激12h，与对照组相比，M2型巨噬细胞的标志物MR和用了IFN-γ+LPS干预，刺激分化为M1亚型；用IL-4干预，ArgΙ在mRNA水平具有不同程度的显著性升高。三组MR刺激分化为M2亚型，是在众多的研究基础上选择了较为经典表达水平的升高程度无太大差异，而ArgΙ的表达在小剂量干的刺激物，避免了对细胞生长产生较大影响。

预组反而升高最多。（图３）

在病理状态下，巨噬细胞可根据其获得的刺激信号分不同化成 M1或M2亚型，如脂肪来源的脂质可防止巨噬细胞向M1型转化［12］，则AS发生发展过程中M1和M2亚型巨噬细胞可同时存在于粥样斑块内。巨噬细胞的异质性说明微环境的不同刺激因子和信号可改变巨噬细胞亚型和功能，进而对疾病的转归产生影响。已有一些文献报道，在特定条件下，已分化的M1型和M2型巨噬细胞之间还可相互转化。例如，高脂饮食可导致脂肪组织巨噬细胞M2型向M1型转化，而运动则可以使转化方向逆转［13,14］，CD40L亦可诱导巨噬细胞向M1型极化，而IL-6可以诱导M1型巨噬细胞向M2型转化［15］。

AS作为一种严重危害人类健康的慢性炎症性疾病已被关注多年，但对于其发病机制的探讨仍众说纷纭［16］。在AS的发生发展过程中，巨噬细胞的作用贯穿始终，从脂质条纹的产图3 不同干预条件下RAW264.7细胞M2型标志物MR和Arg I的mRNA生到最终斑块破裂和心肌梗死，都起到不可或缺的作用。近期水平表达

的研究发现，巨噬细胞的亚型不同可能会影响炎症性疾病的转

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102 lirpA 2.oN 11 emuloV 志杂学病脏心子分国

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基础研究

归［17］，在炎症早期，多种炎性介质能够诱导Ｍ1型巨噬细胞比例升高，利于清除病原微生物，推动炎症的进展；但随着炎症进一步发展，Ｍ2型巨噬细胞逐渐增多，一旦占据主导地位，便可延缓或抑制炎症反应，促进损伤修复。研究如何诱导巨噬细胞成为M1/M2亚型对于此类疾病的治疗或有重要的意义，

这种现象也为研究巨噬细胞在AS的作用中提供了新的研究思路，抑或成为AS的治疗靶点。

结论：RAW264.7可被适当浓度的IFN-γ+LPS /IL-4成功诱导成M1/M2亚型，且细胞生长状态未受太大影响，并进行后续试验。

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