植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告

实验小组成员：

姓名 班级

2013 年4 月 20 日

绿豆的植物组织培养

学号

一、实验目的

1．通过诱导绿豆根、茎、芽形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法。

2．熟悉植物组织培养各阶段的过程，初步掌握无菌操作的植物组织培养方法。

3．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。 二、实验原理

1. 植物细胞的全能性：

一切植物，都是由细胞构成的，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植株的潜能。 2. 植物组织培养技术：

把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。 3. 组织的分化与器官建成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。 4. 培养基的组成

培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验材料，器具药品 材料：绿豆种子

器具：高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、 镊子、记号笔、有盖培养瓶、烧杯、剪刀、棉花、

培养皿、牛皮纸、酒精灯。

药品：MS培养基、糖、琼脂、灭菌水、75%消毒酒精，1%升汞溶液 四、实验步骤

（一）实验前清洗培养瓶，并将培养皿、镊子剪刀等器具和蒸馏水包好进行高压灭菌，器具

烘干待用

（二）准备绿豆种子，用水进行发胀（一般上午泡着下午用） （三） 配置培养基

1.配母液：根据MS培养基母液配制表配母液 2.配制培养基：

1）将贮藏的母液按顺序排好。

2）称好所需的琼脂、蔗糖，准备好蒸馏水及包纸、橡皮筋等。 3）配制：水、药、糖、琼脂→混合→加热溶解→调pH 4）分装：分装到有盖培养瓶中，液层约1到2cm 5）灭菌：高压灭菌→冷却→凝固 （四）接种与培养

1. 在接种前，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯进行杀菌，后关闭紫外线灯，将

3月4日 升汞溶液，无菌水，绿豆，烧杯等放入超净工作台。

2.上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面。用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，再浸入无菌水中，对培养皿要过火烤干。

3. 在超净工作台上，往经浸泡处理的绿豆瓶中倒入适量1%升汞溶液，浸泡消毒10min，不时用镊子搅动，期间拿出两个培养皿待用。10min后倒掉升汞溶液，倒入无菌水清洗，清洗

3月11日 3月18日 5次，此过程在酒精灯火焰旁操作。

4.清洗完成后，倒掉废液，将绿豆取出放在培养皿中分成几份盖上盖子，准备接种，用酒精棉球擦拭手及台面

5. 接着按小组进行接种，将灭菌处理好的绿豆种子在超净工作台上用镊子夹取靠近酒精灯的外焰放入向下倾斜的培养瓶杯中，横放保证不滑动，不弄破培养基，种子口朝上。每个瓶内装7粒豆子，接种过程中培养瓶应一直保持向下倾斜，直到接种完毕盖上瓶盖，做上标记，以上过程都在超净工作台中进行，保证无菌操作，最后放入光照培养箱中培养。

6. 一周后观察种子的萌发状况，挑选长势较好的幼苗用同样的接种方法将外植体接入不同的培养基上，接1瓶茎1瓶芽。在超净工作台上，取出绿豆芽，剪掉顶芽，稍留一截以便插入培养基，茎剪成约1cm厘米的小段，平铺在培养基上。培养茎和芽的培养基配方不同，在原有MS培养基中加入了不同的植物激素。最后将两个培养瓶做上标记，统一放到培养室中进行培养。

7.一周后观察外植体的分化情况，记录种子的萌发率、污染率、丛芽诱导率以及愈伤组织的诱导率。最后纪录实验结果。 五、实验注意事项

酒精灯也是必不可少的，不管接种过程还是开关培养瓶，都应该在酒精灯上操作。操作过程中所有的动作都应尽量的小幅度，特别是不能横扫所有灭过菌的东西，如：消过毒的镊子、手术刀、培养皿等；接种时手指不能接触到瓶口，如果镊子不小心碰到瓶口或台面，马上消毒或直接换掉；分切的整个过程动作要快，时间越长越容易污染。 六、实验结果

根据观察记录，所接种子7个，发芽5个，两个长得很健壮。发育成愈伤组织时，芽都生长良好，无污染状况，长出了新的植株体,但是有一个茎段疑似长了白色的菌体。 种子的萌发率=(5/7)×100%=71.4%

种子的污染率：0 外植体的污染率：0 愈伤组织（茎）的诱导率：(6/7) ×100%=85.7% 丛芽诱导率=(2/2) ×100%=100% 七、实验反思及体会

本次实验本组还是比较成功的，相对其他组污染率较低，但是可能由于操作不当例如并没有完全靠近火焰，工具碰到了其他地方导致有细菌进入到培养瓶中导致一些污染。在本期试验中，由于各组的培养条件，工具材料都是一样的，但得到的结果却不一样，污染情况也不同，由此看来在植物组织培养技术中，无菌操作至关重要。通过本次试验基本了解了植物组织培养的前期步骤和方法，随着时间延长，因为营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，导致死亡，所以没有观察到愈伤组织后来的生长特点，有些遗憾。 思考题：为了降低污染率，该如何进行无菌操作？

1、必须在超净工作台中完成接种，不在试验中将手伸出，最好戴口罩不说话 2、在操作前用酒精洗净双手或酒精棉球擦拭双手

3、用75%的酒精棉球擦拭各种盛溶液的瓶子，工具及超净净工作台台面

4、工具每次在用之前先要经过高压灭菌，用时酒精消毒后在火焰上进行烘烤 5、在取无菌实验材料时要尽量小心，避免造成污染

6、在接种时，镊子等工具不能碰到培养瓶的瓶口及甁壁，所有操作均在火焰旁进行，完成后马上盖紧培养瓶瓶盖