药物分析实验内容(5)

取胶丸20 粒，精密称定，用注射器将内容物抽出，再用刀片切开丸壳，用乙醚逐个洗涤丸壳3次，置50 mL烧杯中，再用乙醚浸洗1~2 次，置通风处，使乙醚挥散，精密称定，算出每丸内容物的平均装量。

2. 供试品溶液的制备、测定与计算

取本品适量，精密称定，置25 mL容量瓶中，用环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取0.8 mL，再用环己烷稀释至25 mL，即制成每1 mL中含9~15单位的溶液，用分光光度法测定吸收峰的波长，并在下列各波长处测定吸光度。计算各吸光度与波长328 nm处吸光度的比值和波长328 nm处的值。

波长（nm） 吸光度比值 300 0.555 316 0.907 328 1.000 340 0.811 360 0.299

如果最大吸收波长在326 ~329 nm之间，且所测得各波长吸光度比值与表中规定的比值的差至不≦±0.02，可用下式计算含量：

每1 g供试品中含维生素A的单位数

1%=E1cm(328nm)?1900

如果最大吸收波长在326~329 nm之间，所测得各波长吸光度比值与表中规定的比值的差至不≧±0.02，则按下式求出校正后的吸光度值。然后再计算含量。

A328(校正)＝3.52（2A328－A316－A340）

如果校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3％，则不用校正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算含量。

如果校正吸光度与未校正吸光度相差在-15％至-3％之间，则以校正吸光度计算含量。 如果校正吸光度超过未校正吸光度的-15％或+3％，或者吸收峰波长不在326~329 nm之间，则供试品须按皂化法测定。

【注意事项】

1. 维生素A遇光易氧化变质，故测定应在半暗室中尽快进行。测定中所用的乙醚，必须不含过氧化物。

2. 注射器及刀片必须清洁干燥，使用后，必须用乙醚洗涤干净，不能有沾污。 3. 测定前应对所用仪器进行波长校正，若仪器波长不够准确，则会带入较大误差。

【思考题】

1. 计算式中1900的物理含义是什么？如何导出的？ 2. 如何确定取样量？ 3. 简述测定波长的选择原则。

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实验十 六味地黄颗粒中丹皮酚和马钱苷的测定（8 学时）

【实验目的与要求】

1. 了解紫外可见分光光度法和高效液相色谱法在测定中药制剂中成分含量中的应用及其优缺点；

2. 了解六味地黄的组成、性质以及其成分测定的方法； 3. 掌握中药制剂含量测定中检测对象的选择原则。

【实验原理】

1. 处方：

熟地黄320 g，酒萸肉160 g，牡丹皮120 g，山药160 g，茯芩120 g，泽泻120 g。

《中国药典》（2010年版）规定，本品每袋含牡丹皮按丹皮酚（C9H10O3）计，不得少于7.2 mg，本品每袋含酒萸肉按马钱苷（C17H26O10）计，不得少于4.8 mg。 2. 测定原理

六味地黄颗粒由熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味中药制成。其中牡丹皮、酒萸肉是其主要药味。牡丹皮的特征性成分丹皮酚具挥发性，且在紫外光区有吸收，因此可以采用水蒸气蒸馏提取，紫外可见分光光度法测定含量，吸光系数法定量。马钱苷(1oganin)属环烯醚萜苷类,是酒萸肉中的主要药效成分之一，具有对非持异性免疫功能有增强作用，能促进巨噬细胞吞噬功能，延缓衰老；有良好的防癌防辐射功效和抗炎、抗菌作用，《中国药典》（2010年版）规定酒萸肉以其中马钱苷为指标，采用高效液相色谱法测定其含量。

【实验材料、试剂与仪器】

原料名称 六味地黄颗粒 马钱苷 50%甲醇 中性氧化铝 规 格 普通市售 对照品 取甲醇63g加水至100ml即得。 100～200目 用 量 20包 5 g（？） 适量 适量 紫外-可见分光光度计，水蒸气蒸馏装置，高效液相色谱仪，具塞锥形瓶，回流装置，容量瓶，移液管，研钵，柱层析色谱柱。

【实验方法与步骤】

1. 牡丹皮中丹皮酚的含量测定

取六味地黄颗粒10 袋，精密称定内容物重量，研细，取约2 g，精密称量，用水蒸气蒸馏，收集馏出液约450 mL，置500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度。利用紫外-可见分光光度计，在274 nm波长处测定吸光度，按丹皮酚（C9H10O3）吸收系E1cm1% 数为862计算，即得。

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A?VE?L?100含量（mg/袋）=?平均装样量?1000 WA?500862?1?100 =?平均装样量?1000W1m2. 酒萸肉中马钱苷的含量测定

（1）色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅基键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（15：85）为流动相；柱温为40 ℃；检测波长为236 nm。理论板数按马钱苷峰计算，应不低于4000。

（2）对照品溶液的配制 取马钱苷对照品适量，精密称量，用50%甲醇配制成每1 mL含20 μg的溶液。

（3）供试照品溶液的配制 取装量差异项下的本品内容物适量，研细，取约1 g，精密称量，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h。放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤。精密量取续滤液10 mL，加在中性氧化铝柱（100~200目，4 g，内径为1 cm）上，用40%甲醇50 mL洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣用50%甲醇适量使溶解，并转移至10 mL容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 （4）测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，进样，测定。根据对照品、供试品的峰面积，计算马钱苷的含量。本品每袋含酒萸肉按马钱苷（C17H26O10）计，不得少于4.8 mg。

【注意事项】

1. 水蒸气蒸馏过程中要时刻注意安全管中水位的变化。 2. 中性氧化铝柱的填充要均匀。

3. 采用外标测定含量时，应严格定量操作，且需要平衡3次以上的操作。

【思考题】

1. 中成药含量测定中检测对象的选择原则有哪些？本品为什么选择丹皮酚和马钱苷进行含量测定？

2. 六味地黄颗粒的鉴别都采用了什么方法？需要检查哪些项目？ 3. 中药含量测定常用的方法有哪些？高效液相色谱法具有哪些优点？

参考文献

1. 国家药典委员会. 中华人民共和国药碘2010版. 北京：中国医药科技出版社，2010年。 2. 宋粉云. 药物分析实验.北京：中国医药科技出版社，2007年。

3. 狄斌. 药物分析实验与指导（第2版）. 北京：中国医药科技出版社，2010年。 4. 杭太俊. 药物分析（第七版）. 北京：人民卫生出版社，2011年。

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