红毛五加叶水提液对羟自由基清除率的测定

红毛五加叶水提液对羟自由基清除率的测定

11*2

杨鑫嵎，杨文宇，叶强

（1．西华大学生物工程学院，四川成都610039；2．成都中医药大学药学院，四川成都610075）

摘要［目的］测定红毛五加叶水提液对羟自由基的清除率并评价其抗氧化活性。［方法］利用Fenton反应产生羟自由基，用二甲亚砜

（DMSO）捕获羟自由基并与之反应生成甲醛，4－二硝基苯肼衍生成相应的苯腙，甲醛经2，通过HPLC检测加或不加样品时该苯腙的峰

5μm），面积的变化，从而计算红毛五加叶水提液对羟自由基的清除率。色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18（250mm×4．6mm，流动相为

2+

V/V），Fenton反应体系为2．0mmol/LFe+107．7mmol/LH2O2+乙腈－水（65∶35，流速为0．8ml/min，检测波长为365nm。［结果］

225．2mmol/LDMSO；在该反应体系中红毛五加叶水提液清除羟自由基的IC50为0．67mg/ml（即每1ml含药材量为0．67mg）；红毛五加叶总皂苷是清除羟自由基的活性成分。［结论］红毛五加叶水提液能够清除Fenton反应产生的羟自由基，具有较强的抗氧化活性。关键词红毛五加（AcanthopanaxgiraldiiHarms．）；Fenton反应；HPLC；抗氧化中图分类号R282．2文献标识码A文章编号0517－6611（2011）35－21653－04DeterminationonScavengingActivityofAcanthopanaxgiraldiiLeavesAqueousExtracttoHydroxylRadicalsYANGXin-yuetal（SchoolofBioengineering，XihuaUniversity，Chengdu，Sichuan610039）

Abstract［Objective］TheaimwastodeterminethehydroxylradicalsscavengingcapacitybytheleavesaqueousextractofAcanthopanaxgiral-diiHarms．foritsantioxidantactivityevaluation．［Method］TheproposedmethodemployedthereactionbetweenhydroxylradicalsgeneratedbytheFentonsystemanddimethylsulfoxid（DMSO）toformformaldehyde，whichthenreactedwith2，4-dinitrophenylhydrazine（DNPH）toproduce

DNPH）．ThehydroxylradicalsscavengingratewascalculatedbytheHPLCpeakareasofHCHO-DNPHinthecorrespondinghydrazone（HCHO-theabovereactionsystemwithorwithoutA．giraldiiasascavenger．ThechromatographicconditionsincludedaDiamonsilC18column（250mm×

5μm），amobilephaseconsistingofacetonitrile-water（65∶35，V/V），aflowrateof0．8ml/minandultravioletdetectionat365nm．4．6mm，

［Result］TheoptimizedFentonsystemforHCHO-DNPHgenerationwas2．0mmol/LFe2++107．7mmol/LH2O2+225．2mmol/LDMSO．Thehalf-scavengingconcentration（IC50）oftheA．giraldiileavesaqueousextractwas0．67mg/ml（i．e．0．67mgcrudeleavesto1mlvolumes）．ThetotalsaponinsofA．giraldiileaveswereonepartofactiveingredients．［Conclusion］TheA．giraldiileavesaqueousextractisapotenthydroxylradicalsscavengerwithpotentialantioxidantactivity．

KeywordsAcanthopanaxgiraldiiHarms．；Fentonreaction；HPLC；Antioxidation

红毛五加（AcanthopanaxgiraldiiHarms．）在四川阿坝藏《四川省中药材标族羌族自治州有较多分布，并有栽培，为（1987）收载品种。红毛五加以茎皮入药，具有祛风除湿准》

增强免疫力和强筋壮骨的功效。现代研究表明其有抗肿瘤、和抗氧化等活性

［1－2］

加或不加待测样品时HCHO－DNPH峰面积的变化，测得样品的羟自由基清除率，以此来评价样品的抗氧化活性，以期为红毛五加叶的抗氧化作用的进一步研究提供理论依据。11．11．1．1

材料与方法材料

研究对象。红毛五加叶，采于四川省茂县羌寨农副

。五加叶作药用见载于《日华子本草》：

“治皮肤风，”可作蔬菜食。长期以来，阿坝当地羌族和藏族居认为其有祛风通络、强民习惯以红毛五加叶作为茶叶饮用，

身健体和延年益寿等作用。红毛五加茎皮含有皂苷、多糖及一些酚性化合物，其叶中也含有这些成分

［3－5］

经鉴定为Acan-土特产品开发有限公司红毛五加栽培基地，thopanaxgiraldiiHarms．，晒干后使用。1．1．2

200II高效液相色谱仪（含主要仪器。依利特P-UV200II紫外检测器、EC2000色谱数据处理系统），购自大214电子天平，购连依利特分析仪器有限公司；DENVERTB-S数显恒温水浴锅，购自郑州佳创自美国丹佛仪器公司；HH-仪器设备有限公司。1．1．3

主要试剂。抗坏血酸（分析纯），购自成都金山化学

7H2O）、30%过试剂有限公司；二甲亚砜、硫酸亚铁（FeSO4·2，4-甲醛溶液（37%）、二硝基苯肼、甲醇、乙醇、盐氧化氢、

酸、镁粉、醋酐、α-萘酚、浓硫酸均为分析纯，购自成都科龙化学试剂有限公司；中性氧化铝（化学纯），购自成都科龙化学购自美国Tedia公司；水为重试剂有限公司；乙腈（色谱纯），蒸水。1．21．2．1

方法

Fenton反应体系储备液的配制。硫酸亚铁储备溶

。研究表明五

［6－11］

加属（AcanthopanaxMiq．）多种药用植物的叶及茎皮多具有较强的抗氧化活性，抗氧化作用与其功效有密切关系

。

天然产物抗氧化作用的机理之一是清除羟自由基；机体在一多种疾病与羟自定的病理条件下能够产生较多的羟自由基，由基所致的氧化性损伤有关

［12－14］

。目前有关红毛五加叶的

［15］

试验借鉴Tai等的方法，用HPLC对红抗氧化作用鲜有报道，

毛五加叶的清除羟自由基活性进行了分析

。该方法的基

本原理是利用Fenton反应产生羟自由基，羟自由基与二甲亚4-砜反应生成甲醛（HCHO），甲醛经2，二硝基苯肼（DNPH）DNPH），衍生后生成腙（HCHO-通过HPLC分析反应体系中

四川省教育厅科研基金项目（10zc057）；西华大学重点科研

基金项目（Z0820503）。

作者简介杨鑫嵎（1986－），男，四川乐山人，在读硕士，从事天然产物

中药学博士，副教授，的提取及其功能研究。*通讯作者，E-mail：youngwenyu@从事中药及天然药物活性成分研究，

hotmail．com。

“中药生物技术二级试验室（川中医鸣谢试验同时得到西华大学

119）”药函2009-和“天然药物研究与工程校重点试验室

（XZD0821-09-1）”的资助。

09-02收稿日期2011-基金项目

7H2O）0．1390g，液。精密称得硫酸亚铁（FeSO4·置50ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成10．0mmol/L的溶液备用。过氧化氢储备溶液。精密吸取2．0ml浓度30%过氧化置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成氢溶液，

195．8mmol/L的溶液，备用。二甲亚砜储备溶液。精密吸取1．0ml二甲亚砜，置50ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，

制成281．5mmol/L的溶液备用。以上储备溶液，根据试验需要稀释成适当浓度使用。1．2．21．2．2．1

红毛五加叶水提液的制备及化学成分定性分析。水提液的制备。取红毛五加叶药材，粉碎（过80

试管中加水5．0ml使溶解，加α-萘酚试液1．0ml，沿管壁加浓硫酸2．0ml，观察现象并记录。1．2．2．5

醋酐－浓硫酸反应。取红毛五加叶水提液50．0

ml，过中性氧化铝小柱，流出液挥干，加无水甲醇10．0ml，滤滤液挥干，加醋酐2．0ml使溶解，加浓硫酸1．0ml，观察过，现象并记录。1．2．31．2．3．1

HPLC分析。色谱条件

［16］

目筛），称取5．500g，加水1000 …… 此处隐藏：13491字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……