SOP标准操作程序-ALT

SOP标准操作程序

ALT 谷丙转氨酶（货号：OSR6107）

实验原理：

ALT（EC 2.6.1.2）是氨基酸代谢中所涉及的一个酶，分布于很多组织。在肝脏组织与肾脏组织中含量最高。组织破坏会使细胞内的酶进入血液循环。很多种疾病，比如肝炎、单核细胞增多症和肝硬化，都会发现血清ALT升高。下列疾病例如：心肌梗塞，ALT不会特别高。因此ALT认为是肝脏特异性酶。

奥林巴斯AU400ALT的程序是基于Wroblewski和LaDue创建，并由IFCC（国际临床化学联合会）推荐的改良方法。ALT从L-丙氨酸上转氨基到阿尔法酮戊二酸。生成丙酮酸与L谷氨酸。丙酮酸的NADH被乳酸脱氢酶催化形成乳酸与NAD，由于NADH被消耗引起在340/380nm吸光度下降从而计算出ALT的活性。

ALT

L-谷氨酸+酮戊二酸-------------﹥L谷氨酸+丙酮酸

LDH

丙酮酸+NADH+H---------------﹥L乳酸+NAD

标本：

病人准备：无特殊要求。

类型：无溶血的血清或肝素化的血浆。轻微的溶血不会明显的影响结果，可是，红细胞内的ALT是血清中的3～5倍。收取标本后尽快分离血清。EDTA的血浆也可以用。应用EDTA血浆为标本结果乘以1.02将与血清标本的结果相一致。

标本稳定性：血清中的ALT在0～4℃稳定3天。当存放于﹣20℃稳定期长于3天。EDTA血浆中的ALT放在室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃）可以稳定7天。

仪器与材料:

仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪

材料：奥林巴斯AU640丙氨酸氨基转移酶（ALT）

参与反应成份的最终浓度：

Tris缓冲液（PH 7.5） 100 mmol/L

L-谷氨酸 500 mmol/L

NADH 0.2 mmol/L

乳酸脱氢酶 ≧1.8 kU/L

酮戊二酸 12 mmol/L

其中含有稳定剂与保护剂。

注意：1.此试剂为体外诊断用。

2.不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

试验用试管的直径在12～16mm。

试剂准备：奥林巴斯AU640的ALT试剂是即开即用的。无需特殊准备。

执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU400 ALT试剂已经建立的程序。 重复性：重复性的评估是根据NCCLS推荐的典型方法，AU640批内重复性小于3%，总不

精密度小于5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

方法学比较：奥林巴斯AU640 ALT（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做55个病人标本。相关系数达到0.999，回归方程如下：

ALT方法1=（ALT方法2×1.03）＋0.1

病人结果数值分布：3～85U/L

敏感度：在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化0.19毫吸光度为1U/L。

试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。

2.开盖后放于仪器中可以稳定30天。

变质指示：当试剂有浊度时，不能继续使用。

校准：

标准液的准备：这个实验不需要标准液。

校准程序：ALT的校准中基于NADH的摩尔消光系数，在340nm为6300。

质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析。

操作程序（逐步地）：

AU640开机

1.认两瓶清洗剂有足够的量。

2.打开蒸馏水供应系统的阀门。

3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWER ON]键。

4.确认打印机为开机并处于联机状态。

5.在[Start Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。

6.如果有需要请进入password。

7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。

8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。

开始分析:

1.把定标、质控、和标本架放在仪器的Rack Feed上。

2.用鼠标点击在屏幕最上方[开始分析]图标。

3.点击F2退出键退到主屏幕。

分析参数

样品体积 10微升 吐水量 0微升

试剂I体积 100微升 吐水量 50微升

试剂II体积 50微升 吐水量 50微升

波长 340/380 方法 Rate

读点 14/27 温度 37℃

完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。

计算：

无需手工计算，结果自动以U/L打印。

报告结果:

参考范围： 7～52U/L

在North Texas的200名献血者中得到。

不正常结果的处理程序：

根据仪器参数的正常值会打印异常标志。

报告格式：

自动的打印37℃U/L的报告，如果以uKat/L报告结果，要乘以0.017。

操作过程注意事项：

操作过程的限制性：OlympusAU640 ALT的线性范围是3～500U/L。样品浓度超过线性范围应稀释重做。在AU640中应用自动重做功能，标本重做后会自动乘以稀释倍数。

超范围的标本也可以手工加一份血清4份生理盐水，轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以5。

干扰物质：

ALT受以下物质干扰：

乳糜 乳糜达到300mg/dL时影响小于3%

溶血 血红蛋白达到500mg/dL时影响小于10%

胆红素 胆红素达到40mg/dL时影响小于3%

丙酮酸 丙酮酸浓度达到1mmol/L时影响小于3%

Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰，请参看Young发表的文献。

参考文献：

1. Worblewski,F.,and LaDue,J.S.,Proc Soc Exp Biol Med,91:569,1956.

2. Bergmeyer,H.U.,and Horden,M.,J.Clin Chem Clin Biochem 18:521-524,1980.

3. Murray,R.L.,Alanine aminotransferase In:Method in Clinical Chemistry,Pesce,A,J.,and

Kaplan,L.A. eds.,C.V.Mosby,St.Louis,1987.

4. Tietz,N.W.(Ed),Fundamentals of Clinical Chemistry,3rd Edition,W.B.Saunders,1987.

5. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.

6. Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests,4th Edition,AACC Press,1995.

7. Tietz,N.W.(Ed),Clincial Guide to Laboratory Tests,2nd Edition,W.B. Saunders,1990.

8. NCCLS,Evaluation Protocol EP5-T2,1992.