弯曲菌菌种冷冻保存及复苏方法的研究

主要介绍一种比较好的保存空肠弯曲菌的方法

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中国食品卫生杂志

CHINESEJOURNALOFFOODHYGIENE

　　　　　　　　2007年第19卷第6期

　　　实验技术与方法

弯曲菌菌种冷冻保存及复苏方法的研究

骆海朋　陈　倩

(北京市疾病预防控制中心,北京　100013)

摘　要:目的　探索一种简单、方便、有效的弯曲菌菌种保存方法。方法　采用含30%甘油的脑心浸液肉汤,将实

验室保存的19株弯曲菌于-30℃和-70℃分别保存,每个菌株3个菌种管。1年后,采用5%脱纤维羊血的布氏肉汤进行增菌,然后转种哥伦比亚血平板,比较存活效果。结果　-30℃条件下采用多管法保存弯曲菌可以获得与-70℃条件下保存相当的效果。结论　采用多管法(每株菌3个菌种管)于-30℃冷冻保存弯曲菌是一个简单、方便、有效、实用的方法。

关键词:弯曲杆菌属;保存,生物学;低温保存

StudiesofMethodsofFreezingStorageofCampylobacterand

RecoveryofFrozenStorageStrainLUOHai2peng,CHENQian

(BeijingMunicipalCenterforDiseaseControland,,China)

Abstract:Objective　TofindaneasyandeffectivecamMethod　Campylobacterstrains

werestoredinthecontentof30%19isusedinthisstudyandstoredat-30℃and-70℃andeverystrainA,thefrozenstrainswererecoveredinthecontentof5%sheepbloodprestonbrothfor24ontheColumbiabloodplate.Results　Inone2yearstore,thestorageofthestrainsinthetem-30℃hadthesameeffectasthestorageofstrainsinthetemperatureof-70℃.ConclusionThemethodofstorageofcampylobacterinmultitubesinthetemperatureof-30℃maybeaneasyandeffectivemethod.

Keyword:Campylobacter;Preservation,Biological;Cryopreservation

应、毒素、噬菌体敏感性、药敏性等方面都存在一定

[7]

的变异,易于造成漏检。食品中的霍乱弧菌含量相对较少,且有一定程度的损伤和(或)抑制,致使检测更加困难。副溶血性弧菌的检测同样存在着上述类似的问题。荧光PCR的高灵敏度、高特异性,特别是如果从食品样品直接提取DNA则3h左右能出结果的快速性,能有效地解决以上困难,很好地满足对食品中致病性弧菌快速检测的需要。参考文献

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[收稿日期:2007-07-25]

中图分类号:R15;Q93-33;R44615　　文献标识码:B　　文章编号:1004-8456(2007)06-0514-05

作者简介:骆海朋　男　主管技师　硕士

主要介绍一种比较好的保存空肠弯曲菌的方法

弯曲菌菌种冷冻保存及复苏方法的研究———骆海朋　陈　倩—519—

　　弯曲菌是一类对生长条件要求非常苛刻的细菌,需要在微需氧的环境下(约10%CO2,5%O2)才能良好地生长。弯曲菌也是一类保存比较困难的细菌,用一般的方法保存有一定的困难,在实际菌种保藏工作中如操作不当极易造成菌种的死亡。有效的保存分离菌株是对弯曲菌进行研究的基础。在过去的研究中,采用的保存方法种类比较多,文献[1,2]采用真空冷冻干燥技术进行保存菌种,在FDA的方法中,介绍冷冻培养基-70℃冷冻保存以及半固体保存方

[4]

法,在国标中短期采用4℃冰箱微需氧保存,长期保存用冻干法。在上述方法中最稳定有效的方法是真空冷冻干燥技术,但是该方法较为复杂,还需要冷冻干燥设备。而半固体和新鲜菌落于微需氧条件下保存的时间比较短。-70℃冷冻保存方法相对简单,但是-70℃冰箱价格昂贵,基层单位比较少。

在对菌种的复苏方法中,有的直接将菌种涂布

[1]

平板微需氧培养,有的将菌种加入增菌液中进行增菌后再涂布血平板,复苏方法的差异会严重影响菌种保存的效果。为探索一套方便有效的弯曲菌菌种保存及复苏方法,本实验室用30%浸液肉汤,分别在-30℃及-70℃进行多管(每个菌种,加抗生素的布氏肉汤24h,48h。实验的菌株为2004年及2005年分离到的弯曲菌共19株,其中包括空肠弯曲菌、结肠弯曲菌和红嘴鸥弯曲菌。1　材料及方法

111　培养基　哥伦比亚血琼脂　哥伦比亚基础培养基(OXOID),按照培养基配置的说明进行配置并进

[3]

[3]

11411　菌种制备　将弯曲菌菌种划线接种于哥伦

比亚血琼脂平板,42℃微需氧条件下培养48h,获得活力旺盛的菌体。

菌种保存　按照体积比将脑心浸液肉汤加入30%的灭菌甘油,分装到塑料菌种保存管中备用,也可以将其冷冻保存随用随取。用接种环刮取哥伦比亚平皿表面的菌体,溶于脑心浸液肉汤甘油中。将菌浓度调到6个麦氏浓度以上。将制好的脑心浸液甘油菌悬液,于-30℃或-70℃的冰箱中迅速冷冻。11412　菌种的复苏　将菌种管从冰箱中取出,室温放置呈为液态后,将整管的菌悬液加入到未加抗生素的布氏肉汤10ml中,在微需氧的条件下培养24h,如菌体损伤严重,需要复苏的时间较长,培养24h菌体得不到有效的复苏,需要再继续培养24h。将培养24～48h的增菌液划线接种于哥伦比亚血平板,于微需氧的条件下培养48h得到复苏的菌种。将本实验室从禽类中分离到的弯曲菌19株按上述方法于2005年42006年4月取出,用,。211　在-70℃保存的菌种共19株,采用本方法全

部存活。212　在-30℃保存的菌种共19株,在菌种复苏培养过程中3个菌种管中的弯曲菌在增菌过程中没有复苏成功,但由于在保存的过程中,1个菌株保存了3管,其它菌种管保存的菌株用相同方法进行培养获得了成功。

本文采用加入30%甘油的脑心浸出液肉汤对弯曲菌进行菌种保存,用未加抗生素的布氏肉汤进行复苏,此方法简单、实用、有效,不需要特殊的设备,适用于基层微生物实验室日常弯曲菌菌株保存工作。参考文献

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[6]　Food2bornepathogensmonographnumber3:Campylobacter.Technical

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行高压灭菌,将培养基保温到45℃,然后加入5%的

脱纤维羊血制血平板。脑心浸液肉汤　脑心浸液干粉培养基(北京陆桥技术有限责任公司 …… 此处隐藏：2639字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……