菌种生产技术规程

DB21

辽宁省地方标准 （ 辽宁省质量技术监督局发布） DB21/T1730—2009

北虫草菌种生产技术规程

1 范围

本标准规定了北虫草菌种定义，制作要求，质量要求，标志及储存要求。

本标准适用于北虫草菌种生产。

2 规范性引用文件

GB/T191-2008 外包装储运图示标志

GB/T6388-1986 运输包装收发货标志

NY/T528-2002 食用菌菌种生产技术规程

《食用菌菌种管理办法》 （中华人民共和国农业部第62号令发布）

3 定义

本标准采用下列术语和定义

3.1 北虫草菌种

北虫草生物学分类地位属于子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属，蛹虫草。它是以中国北方野生蛹虫草为样本，采用组织或孢子分离法，经分离、纯化、驯化，选育获得的具有一致性、稳定性、结实性的真菌菌种，经人工培养进一步扩大繁殖以及用于栽培生产的纯菌丝培养物，包括固体母种和液体生产种。

3.2 固体母种

北虫草菌种的纯菌丝固体培养物及其继代固体培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，又称一级菌种、试管菌种。

3.3 液体生产种

由固体母种接种于液体培养基扩繁而来的纯菌丝液体培养物，培养容器为玻璃瓶或发酵罐，只用于生产不能用于菌种扩繁。

4 制作要求

4.1 技术人员

具有生产北虫草菌种的专业技术人员。

4.2 环境要求

4.2.1 环境卫生

场地要求远离禽畜设施，垃圾场，无污水和其他污染源，通风，透光，地面及四周无灰尘，无虫害等。

4.2.2 设置和布局 按NY/T528中的4.3规定执行（截选）

应按菌种生产工艺合理安排布局。

4.2.2.1 灭菌室

要求水电安装方便，通风良好，空间充足，散热畅通。

4.2.2.2 冷却室

洁净，防尘，易散热。

4.2.2.3 接种室

要设缓冲间，防尘换气性能好，内壁和屋顶光滑，便于清洗和消毒，做到空气清新。

4.2.2.4 培养室和储存室

内壁和屋顶光滑，便于清洗和消毒。培养室和储存室墙壁要加厚，利于控温。

4.2.2.5 菌种实验室

水电方便，利于装备相应的检验设备和仪器。

4.2.3 设备设施 按NY/T528中的4.4规定执行（截选）

4.2.3.1 基本设备

磅称、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、净化工作台、接种箱、调温设备、除湿机、培养架、

恒温箱、冰箱、显微镜等常规用具，产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装瓶装袋机。高压灭菌锅应使用经有关部门检验的安全产品。

4.2.3.2 基本设施

配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养等各环节的设施规模要配套。冷却室、接种室、培养室和储存室都要有调温设施。

4.3 菌种生产工艺流程

4.3.1 流程顺序

培养基配制 → 分装 → 灭菌 → 冷却 → 接种 → 培养 → 检查 → 成品

4.3.2 培养原料

用马铃薯、玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆粕粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏（粉）、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、维生素B1等为原料，经配制后作为北虫草的营养基质。其中，玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆粕粉为市售产品，要求无结块无变质；马铃薯出芽变绿的不能使用；蛋白胨、酵母膏（粉）为生化试剂；葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、为化学纯以上级试剂；琼脂、维生素B1为食品级以上产品；水为自来水等可饮用水。

4.3.3 培养容器

4.3.3.1 固体母种生产容器

使用玻璃试管和胶塞，试管规格为18×180mm或20×200mm，试管塞一般采用胶塞，保存时间短直接用于液体生产种的可以使用棉塞，不能使用脱脂棉做试管塞。

4.3.3.2 液体母种生产容器

使用250ml、500ml玻璃输液瓶，用聚丙烯薄膜和乳胶圈封口。

4.3.4 培养基配制与分装

4.3.4.1 固体母种培养基配制与分装

4.3.4.1.1 固体母种培养基配方

a) 马铃薯200g，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，维生素B1 10 mg，琼脂

20 g，水1000ml，PH6.0-7.0。

b) 葡萄糖100 g，蛋白胨10g，酵母膏1g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，琼脂20 g，水

1000ml，PH6.0-7.0。

4.3.4.1.2 固体母种培养基配制与分装

按配方称好各种原料，将马铃薯洗净去皮去芽眼，切成3-5mm薄片，加水1000ml，文火煮沸20-30分钟，搅拌溶解后，加开水补足至1000ml，趁热分装试管，装量为试管的1/4-1/5，塞入胶塞。

4.3.4.2 液体生产种培养基配制与分装

4.3.4.2.1 液体生产种培养基配方

a) 马铃薯200g，蚕蛹粉10g，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，维生素B1 50

mg，水1000ml，PH6.0-7.0。

b) 葡萄糖100 g，蛋白胨10g，酵母膏1g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，琼脂20 g，水

1000ml，PH6.0-7.0。

4.3.4.2.2 液体生产种培养基配制与分装

按配方称好各种原料，将马铃薯去皮去芽眼，称取200g，切成3-5mm薄片，与蚕蛹粉（或其它配方中的玉米粉、大豆粉、豆粕粉等农产品原料）一起放入锅中，文火煮沸20-30分钟，用8层纱布过滤，滤液用开水补足至1000ml，再依次加入其它成分，搅拌溶解，然后装入玻璃输液瓶中，液体装量不宜超过容器总容积的2/5，瓶口用聚丙烯薄膜和乳胶圈封口。

4.3.5 培养基灭菌与冷却

4.3.5.1 固体母种培养基灭菌与冷却 按NY/T528中的4.7.5规定执行（截选）

母种的培养基配制和分装后应立即灭菌；原种和栽培种培养基配制后应在4h内进锅灭菌。灭菌完毕后，应自然降压。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。

4.3.5.2 液体生产种培养基灭菌与冷却

采用常压灭菌或高压蒸汽灭菌，灭菌方法和规程可参照固体母种培养基灭菌，要点为：常压灭菌时2h内使温度达到100℃保持6-8小时；高压蒸汽灭菌0.11Mpa保持30分钟；高压蒸汽灭菌一定要等灭菌器的压力降为零时，才可开启灭菌器，取出菌种瓶；菌种瓶冷却至室温后方可接种。

4.3.5.3 培养基灭菌效果的检查 按NY/T528中的4.7.6规定执行（截选）

母种培养基置于28℃恒温培养，原种和栽培种培养基经无菌操作接种于GB4789.28-1994中规定的营养肉汤培养基中，于28℃恒温培养，48h后检查，无微生物长出的为灭菌合格。

4.3.6 接种

4.3.6.1 固体母种接种 按NY/T528中的4.7.8规定执行（截选）

4.3.6.1.1 接种室（箱）的基本处理程序

清洁 → 搬入接种物和被接种物 → 接种室（箱）的消毒处理。

4.3.6.1.2 接种室（箱）的消毒处理方法

用药物消毒并用紫外线灯照射。

4.3.6.1.3 净化工作台的消毒处理方法

先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后预净20min。

4.3.6.1.4 接种操作

在无菌室或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后及时贴好标签。

4.3.6.1.5 接种室（箱）后处理

接种室（箱）每次使用后，要及时清理清洁，排除废气，清除废物，台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦拭消毒。

4.3.6.1.6 培养室处理

在使用培养室的前两天，采用药物消毒。

4.3.6.2 液体生产种接种

在无菌操作条件下，用接种钩从母种斜面中切取1㎝2菌面（可稍带培养基）放入液体菌种培养瓶中，迅速用聚丙烯薄膜和乳胶圈封口。每支母种可接种10-15瓶液体生产种。

4.3.7 菌种培养

4.3.7.1 培养条件

4.3.7.1.1 菌种培养温度18-23℃。

4.3.7.1.2 菌种培 …… 此处隐藏：2290字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……