烟草黑胫病菌0号小种不同条件下培养特性的研究

研究了烟草黑胫病菌0号小种的若干培养性状,为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供试验依据。本实验用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素来研究烟草黑胫病菌0号小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等培养特性。结果表明：将0.1%KNO3和1%葡萄糖混合液加入在燕麦培养基上避光培养21d的培养皿中,经26℃恒温培养72h后,突降12℃培养0.5h,最易产生孢子囊和释放游动孢子。

烟草黑胫病菌0号小种不同条件下培养特性的研究

苏振刚 王 静 周 佳 等

(1.中国农业科学院烟草研究所，青岛 266101；2.中国农业科学院研究生院，北京 100081)

摘 要：研究了烟草黑胫病菌0号小种的若干培养性状，为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供试验依据。本实验用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素来研究烟草黑胫病菌0号小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等培养特性。结果表明：将0.1%KNO3和1%葡萄糖混合液加入在燕麦培养基上避光培养21d的培养皿中，经26℃恒温培养72h后，突降12℃培养0.5h，最易产生孢子囊和释放游动孢子。

关键词：烟草；黑胫病菌；培养特性；不同因素

中图分类号：S435.72

Study on the Cultural Characteristics Under Different Conditions of Phytophthora Nicotianae var. nicotianae,

Pathogen of Tobacco Blank Shank No.0

Su Zhengang Wang Jing Zhou Jia

(1.Tobacco Research Institute of CAAS, Qingdao 266101, China; 2.Graduate School of CAAS,

Beijing 100081,China)

Abstract: The study was conducted to observe cultural characteristics of Phytophthora

nicotianae var. nicotianae, pathogenic of tobacco blank shank No.0, were studied to provide more information for relation study and integrated management of the disease. The study uses experimental medium, light, bacteria age, inducing agents and induction time to observe cultural characteristics of Phytophthora nicotianae Breda de Haan var. nicotianae No.0, such as the growth rate of tobacco, sporangium production and tour dynamic spores release ect. The results showed that: The 0.1% KNO3 and 1% glucose solution are added to cultured 21d oats culture medium dish in the dark by 26 ℃ constant temperature, after 72h culture, dump 12 ℃, 0.5h, most likely to produce sporangia and release of tour dynamic spore.

Key words: Tobacco; Phtoph thora parasitica; Culture characteristics; Different factors

烟草黑胫病于1986 年Breda de Haan 在印度尼西亚的爪哇首次发现，此后1

研究了烟草黑胫病菌0号小种的若干培养性状,为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供试验依据。本实验用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素来研究烟草黑胫病菌0号小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等培养特性。结果表明：将0.1%KNO3和1%葡萄糖混合液加入在燕麦培养基上避光培养21d的培养皿中,经26℃恒温培养72h后,突降12℃培养0.5h,最易产生孢子囊和释放游动孢子。

该病迅速传播蔓延，1934 年在山东鉴定出烟草黑胫病[1]。可以侵染烤烟、晾烟、晒烟、白肋烟、香料烟等所有的栽培烟草，破坏性极强[2]，平均发病率为5%-12%，严重田块发病率高达75%，甚至造成绝收。烟草是我国重要的经济作物之一，吸烟是亿万烟民文化生活中不可缺少的一部分，也是国家和地方财税收入的重要来源。研究烟草黑胫病病原菌的生物学特性、病害发生机制等有利于从植物保护、抗病育种和耕作栽培等方面来抑制或减少烟草病害的发生，从而可以减少农药的用量，提高烟叶质量和安全性，同时也有利于环境保护。 1 材料和方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试菌株 烟草黑胫病0号小种由中国农业科学院烟草研究所植物保护研究室提供。

1.1.2 供试培养基 燕麦培养基（OA）:燕麦片30 g ，琼脂18 g，去离子水1 000ml；马铃薯培养基(PDA)：马铃薯200g ，葡萄糖15g，琼脂18g，去离子水1 000ml；玉米粉培养基(CMA)：玉米粉200g，琼脂17g，去离子水1 000mL；番茄汁培养基(TJA)：番茄汁50ml，牛肉膏10g，乳糖20g，酵母提取液5g，琼脂17g，蒸馏水1 000ml；烟草汁培养基：新鲜烟叶200g ，琼脂20g ，蒸馏水1 000ml。

1.2 实验设计

1.2.1 不同培养基和光照处理对菌丝生长的影响

（1）接菌培养 将上述5种培养基经121℃高压灭菌20min后，分别倒入无菌培养皿（直径88mm），挑取生长良好的黑胫病菌0号小种0.5cm2大小的菌丝块转接到培养皿中央部位。将转接菌丝的培养皿平均分成两份，分别倒置于光照和黑暗条件下28℃恒温培养。

（2）试验方法 从第24h起，每隔1d测量一次菌落直径（设5个重复求平均值），至菌丝长满培养皿为止。

1.2.2 培养基和菌龄对孢子囊数量的影响

（1）实验方案 用0.1%硝酸钾溶液浸泡培养7d的菌丝，镜检孢子囊数量，此后，第14d、21d、28d、35d、42d各镜检一次。

（2）实验方法 在超净工作台下，向不同菌龄且长满菌丝的培养皿中分别加入6ml无菌的0.1%KNO3溶液，用封口膜封住培养皿，放置于26℃恒温条件下避光培养，分别将培养12、24、48、72h的培养皿转移至温度突然降低12℃的环境下，恒温培养0.5h。然后，吸取50ul的硝酸钾浸泡液转移到干净的载玻片上，挑取有代表性约1cm2大小的菌丝放入载玻片的溶液里，制成孢子囊悬浮液，在显微镜下(10×40)随机观察3个视野，计数每个视野的孢子囊数量。

1.2.3 不同诱导剂和诱导时间对孢子囊和游动孢子数量的影响

研究了烟草黑胫病菌0号小种的若干培养性状,为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供试验依据。本实验用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素来研究烟草黑胫病菌0号小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等培养特性。结果表明：将0.1%KNO3和1%葡萄糖混合液加入在燕麦培养基上避光培养21d的培养皿中,经26℃恒温培养72h后,突降12℃培养0.5h,最易产生孢子囊和释放游动孢子。

（1）实验方案 用0.1%KNO3、0.1%KNO3和1%葡萄糖混合液分别浸泡不同菌龄的菌丝，以无菌水作为对照(CK)，设置三个重复，镜检孢子囊和游动孢子的数量。

（2）实验方法 同1.2.2，并用血球计数板法计算游动孢子的浓度。

2 结果

2.1 菌落及菌丝形态特征

选择燕麦培养基（OA）上的供试菌株进行观察，菌丝生长旺盛，菌落质地均匀。在显微镜下观察（图1）显示，菌丝粗细不均，无隔膜，有分枝，局部有菌丝膨大体，其上有若干条放射状菌丝。孢子囊卵圆形、近球形或不规则形，通常1个、少数2个呈半球形的乳突；部分孢子囊上有丝状附属物，在条件适合时可释放游动孢子。游动孢子椭圆形或圆形，可在水中游动，遇寄主时萌发产生芽管侵入；当条件不适宜时，孢子囊可直接长出芽管侵入寄主；厚垣孢子是烟草黑胫病赖以度过不良环境的主要形态，本实验并没观察到。

2.2 菌丝生长与培养基和光照的关系

由表1可以看出，黑胫病0号小种菌丝在5种不同培养基上28℃恒温培养生长趋势基本一致，黑暗条件下以OA培养基上的病菌平均生长速度最快，生长的菌丝最丰厚、浓密，其次是烟叶汁培养基，CMA …… 此处隐藏：7233字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……