响应面分析法优化海地瓜酶解工艺及其抗氧化活性的研究

响应面分析法优化海地瓜酶解工艺及其抗氧化活性的研究

响应面分析法优化海地瓜酶解工艺及

其抗氧化活性的研究

侯付景，金春华，董明敏，李妍妍，邵亮亮，苏秀榕

（宁波大学生命科学与生物工程学院，宁波 315211）

【摘 要】目的 为了充分发挥海地瓜的生理功能，优化酶解工艺。方法 本研究选用复合蛋白酶，以羟自由基清除率为标准，利用响应面分析法（RSM）优化水解条件。将最优条件下制得海地瓜水解液，igICR小鼠，42d后，测定小鼠血清和肝脏组织匀浆液中SOD，GSH-Px活力和MDA含量。结果 研究结果显示：最佳的水解条件为：复合蛋白酶加酶量2.02%；酶解温度51.18℃；酶解时间127.81min，此时羟自由基清除率为73.10%。海地瓜水解液使小鼠血清和肝脏组织中的SOD，GSH-Px活力明显提高，MDA含量显著降低。结论 该条件下海地瓜酶水解液具有良好的抗氧

：276－280] 化作用。[营养学报，2010，32（3）

关键词： 海地瓜，响应面，酶解，抗氧化

中图分类号：R151.1 文献标识码：A 文章编号：0512-7955（2010）-03-0276-05

STUDY ON OPTIMIZATION OF ENZYMOLYSIS TECHNOLOGY OF ACAUDINA LEUCOPROCTA BY RESPONSE SURFACE METHOD AND THEIR ANTIOXIDANT

ACTIVITIES

HOU Fu-jing，JIN Chun-hua，DONG Ming-min，LI Yan-yan，SHAO Liang-liang，SU Xiu-rong

(Faculty of Life Science and Biotechnology，Ningbo University，Ningbo 315211，China)

【Abstract】Objective To optimize the enzymolysis condition for Acaudina leucoprocta to research lencoprocta the antioxidant activity of its hyoholysate in vivo. Method Response surface methodology (RSM) was employed to optimize the hydrolysis conditions with protamex. The ICR mice were given ig the hydrolysate of Acaudina lencoprocta obtained under optimal conditions. The activity of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) and the content of MDA in blood serum and liver in mice were analyzed. Results and Conclusion The best hydrolysis conditions were：the amount of enzyme was 2.02%; enzymolysis temperature was 51.18 ℃; enzymolysis time was 127.81min, hydroxyl radical scavenging rate was 73.10%．The activities of SOD, GSH-Px in hydrolysate were significantly enhanced and the content of MDA was significantly lower，which showed that this hydrolysate had remarkable antioxidation activity．So the enzymolysis technology for Acaudina leucoprocta was optimal.[ACTA NUTRIMENTA SINICA, 2010,32(3)：276－280]

Key words：Acaudina leucoprocta；response surface methodolagy；enzymolysis；antioxidation

海地瓜俗名东海香参，属棘皮动物门 （Echinodermata）海参纲（Holothuroidea），芋参目（Molpadida）尻参科（Caudinidae）、海地瓜属（Acaudina）动物，学名海地瓜。该属动物有两个种—白肛海地瓜(Acaudina leuco- procta H.L.Clark)和海地瓜（Acaudina mol-

收稿日期 2009-09-03

基金项目 国家农业科技成果转化资金资助项目(No.2007GB2C220359)；宁波市科技成果转化资金资助项目（No.2007C100055）；

宁波市科技局国际合作项目(No.2008C500265)，浙江省重点社会发展项目

作者简介 侯付景（1982-），女，硕士研究生；E-mail：xingxin0924@http://doc.guandang.net；通讯作者：苏秀榕，E-mail：suxiurong@http://doc.guandang.net

padioides Semper）。海地瓜是一种高蛋白低脂

肪产品，蛋白中非常丰富的人体必需氨基酸。

有关蛋白酶水解生物肽的抗氧化活性已经有大

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量的报道，如大豆蛋白、乳蛋白、鱼类蛋白等在适宜条件下经酶水解都能得到抗氧化肽。不同底物所得到的抗氧化肽在氨基酸组成、数量以

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营养学报2010年第32卷第3期 277

及排列顺序上的差异直接影响肽活性强弱。海地

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瓜中含有丰富的胶原蛋白，但有关其酶水解肽的研究鲜有报道。本实验对海地瓜酶解物的抗氧化活性进行研究。

1 材 料 与 方 法 1.1材料

海地瓜，2008年12月取于象山隅山岛海域。除内脏，清洗后粉碎，于-20℃冻藏；复合蛋白酶购于南宁庞博生物公司；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSP-Px）、丙二醛（MDA）试剂盒购于南京建成生物工程有限公司。ICR雄性小鼠体重[(20～25)±2]g，由浙江省实验动物中心提供。 1.2方法

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1.2.1 响应面设计：本实验使用复合蛋白酶，在不同条件下水解海地瓜制得酶解液，检测其对羟自由基的清除率。实验因素包括温度：45，50，55℃，时间90、120、150 min，加酶量1.5%，2.0%，2.5%。选择单因素实验中对响应值(羟自由基清除

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率)有显著影响的因素。每一自变量的低、中、高实验水平分别以-1、0、1编码。

1.2.2 羟自由基清除率的测定方法：在试管中依次加入6 mmol/L的FeSO4 溶液1ml，不同浓度的多糖溶液1ml，6 mmol/L的H2O2溶液1ml，摇匀，静置10min，再加入6 mmol/L的水杨酸溶液1ml，

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摇匀，静置30 min后于510 nm处测其吸光值。清除率计算公式为：

清除率（%）=[1-(Ai-Aj)/A0]×100

Ai为某质量浓度多糖的吸光值；其中： A0为空白对照；

Aj为无水杨酸时多糖的吸光值。

SPSS13.0软件进行统计分析。

2 结 果 2.1酶解条件

根据单因素结果，利用响应面设计酶解条件。从表1可见15个实验点分为析因点和零点,其中析因点为自变量取值在A、B、C所构成的三维顶点，零点为区域的中心点。

Table 1 Program and experimental results of response

surface methodology

Elimination ratio of CodingTrue value

ABCt(℃)T(min) E(%) hydroxyl radicals(%)1 11055120 2 66.05 2 0-115090 1.5 67.82 3 00050120 2.0 72.67 4 00050120 2.0 72.27 5 0-1-15090 1.5 67.22 6 -10-145120 1.5 52.93 7 00050120 2.0 72.06 8 -10145120 2.5 53.31 9 10155120 2.5 63.70 10 -11045150 2.0 52.91 11 1-105090 2.0 60.36 12 01-150150 1.5 68.07 13 01150150 2.5 68.57 14 -1-104590 2.0 51.96 15 10-155120 1.5 63.81 T：temperature；t：time；E：enzyme No.

2.2回归方程的建立

Table 2 Analysis of variance for response surface

quadratic model

Source

Sum of squares df

1.2.3 动物实验：ICR雄性小鼠40只，按体重随机分空白对照组，衰老模型组，低剂量组、高剂量组和阳性对照组，每组8只，每天自由摄食（普通饲料）和饮水。衰老模型组，低剂量组（每天ig肽浓度为7.5mg/ml的海地瓜水解液1ml）、高剂量组(每天ig肽浓度为15.0 mg/ml的海地瓜水

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表2为响应面二次模型方差分析，从表中解液1 ml)和阳性对照组（每天按4 g/kg …… 此处隐藏：9884字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……