基因工程乙肝疫苗

基因工程乙肝疫苗生物工程1003班 刘祺

什么是基因工程乙肝疫苗？ 基因工程乙肝疫苗(酵母重组)是一种乙 肝表面抗原(HbsAg)亚单位疫苗，它是 采用现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗 原的基因进行质粒构建，克隆进入酵母菌 中，通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝 表面抗原亚单位。这种乙肝表面抗原亚单 位具有原料易得、产量大、安全、高效等 特点。美国默克公司研究的此产品最早获 美国FDA批准。国内生产此产品技术均从 其引进。

用途乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫苗 接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗体，这 种抗体存在于人的体液之中，乙肝病毒一旦出 现，抗体会立即作用，将其清除，阻止感染， 并不会伤害肝脏，从而使人体具有了预防乙肝 的免疫力，从而达到预防乙肝感染的目的。接 种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。

应用学科免疫学(一级学科);应用免疫(二级学 科);免疫预防(三级学科)

发展概况重组酵母乙肝疫苗首先在美国默克公司研 制成功，并于1986年被美国FDA批准通过。 1991年，我国自行研制的第一个基因工程 疫苗—哺乳动物细胞生产乙肝疫苗获准生 产。我国当前已能大规模生产乙型肝炎表 面抗原重组疫苗，分别称酵母重组和CHO (中国仓鼠卵巢细胞)重组疫苗，免疫效 果比同剂量的血源疫苗优良，并且十分安 全，可以放心使用。

应用前景 基因工程乙肝疫苗较之于血液乙肝疫苗主要区别之一在于它生产来源 不同。它有着许多血源乙肝疫苗不可比拟的优势。 自1985年以来，我国一直采用接种血源乙肝疫苗预防乙肝，血 源乙肝疫苗对控制我国乙肝大面积流行曾起了很大作用，但是，由于 血源乙肝疫苗需用乙肝病毒表面抗原携带者的血浆为原料，它具有一 些自身无法克服的缺点： 其一，乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在此情况下， 再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对携带者的身体健康有损害； 其二，疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血浆来源和质量 限制，无法大规模稳定生产； 其三，在表面抗原阳性血浆的采集、运输和加工过程中，存在着 引发血源性传染病流行的可能性； 其四，在血源乙肝疫苗的生产过程中，虽采用三步灭活工艺，但 三步灭活不足以将血源中所有已知和未知的潜在致病因子全部灭活， 难以最大限度地保证血源乙肝疫苗受种者绝对安全； 其五，如上所述，为了灭活乙肝病毒，需采用三步灭活工艺，但 三步灭活对疫苗的免疫原性有影响。因此，由于血源乙肝疫苗的内部 矛盾性，决定了血源乙肝

疫苗只能作为一种过渡性疫苗，1997年卫 生部专门下发57号文件，具体部署用基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝 疫苗事宜。

乙肝疫苗的制备

目的基因的获取编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取 一般的目的基因的获取方法有： 反转录法 化学合成法 反转录—聚合酶链反应法

工程菌的构建CHO(中国仓鼠卵巢)细胞的特点 ①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子 ②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化; ③具有重组基因的高效 扩增和表达能力; ④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进 行悬浮培养 ,表达 水平较高; ⑤CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋 白 ,利于外源蛋白的后分离

目的基因的表达 蛋白质的分离纯化细胞破碎→固液分离→浓缩与初步纯化→高度纯化→成品加工

生产工艺控制 生产工艺 基因工程乙肝疫苗(酵母重组)的生产工艺包 括发酵、提取、纯化、吸附、配制、分装等工序。生产工 艺中采用世界一流的发酵罐，通过全自动控制，提供酵母 菌最优生长条件，发酵后经过细胞破碎和一系列微滤、超 滤、硅胶吸附、洗脱等工序，再经过疏水层析，可使产品 抗原蛋白纯度达99%以上。所有工艺设备可自动清洗、自 动灭菌，有效地减少了种种人为因素的干扰，确保生产稳 定和质量一致性。 质量控制 基因工程乙肝疫苗(酵母重组)严格按照美国 默克公司质量标准进行质量控制，生产单位建立了全面质 量管理体系，产品原辅材料、半成品、成品检测和环境检 测等方面均有严格质控标准和检定程序。

基因工程乙肝疫苗的安全性 基因工程乙肝疫苗(酵母重组)的有效成分来自 能表达乙肝表面抗原的酵母工程菌，之所以选择 酵母这种宿主是因为酵母菌较其他宿主有更高的 安全性和稳定性。这种酵母工程菌源自于啤酒酵 母菌，几千年来，人类利用啤酒酵母生产啤酒的 历史表明啤酒酵母是非常安全的。 基因工程乙肝疫苗(酵母重组)的安全性还 取决于最后产物的纯度，即取决于来自宿主细胞 或生产过程中所使用的原辅材料中残余污染物， 该疫苗生产中所用的原辅材料对人体无害，由于 采用了先进的纯化技术，按默克工艺生产的基因 工程乙肝疫苗抗原蛋白的纯度在99%以上，基因 工程乙肝疫苗(酵母重组)中酵母DNA含量极低， 并且该DNA无法在浦乳细胞中整合表达。

乙肝疫苗的使用基因工程乙肝疫苗(酵母重组)的使用：基 因工程乙肝疫苗(酵母重组)的接种对象、用 法、贮存条件和

有效期等方面均同于血源 乙肝疫苗，但其规格则不同于血源乙肝疫 苗。 基因工程乙肝疫苗(酵母重组)规格为 5μg/0.5ml。之所以采用此规格的主要原因 是基因工程乙肝疫苗的免疫原性优于血源 乙肝疫苗的免疫原性。

不良反应 乙肝疫苗自1979年问世以来，经过20多年的大规 模应用和观察，至今尚未见到有关注射后引起严 重不良反应的报道，只有少数人出现接种部位红 肿、硬结、疼痛、手臂酸重或发热、恶心、呕吐、 乏力、皮疹等与一般疫苗接种大致相仿的轻微反 应，多于1-3天内不治自愈。 由于乙肝疫苗属血 源性的，在制备过程中纯化与灭活程序十分严密， 故不会产生像破伤风等动物血清疫苗可能造成的 过敏反应，也不会感染上乙肝、艾滋病及其他传 染性疾病。与其他疫苗同时接种亦未出现相互干 扰作用。因此，可以说，乙肝疫苗是安全可靠的 预防疫苗，注射前也不必皮试。

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