动物细胞培养和核移植技术---一轮复习

2.2 动物细胞工程◆动物细胞培养 ◆动物体细胞核移植技术和克隆动物 ◆动物细胞融合

◆单克隆抗体制备动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。

资料：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人 的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤 病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想 如何来治疗该病人？

取该患者的皮肤进行 细胞培养,获得足量 的细胞后再移植。

§2.2.1动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 (一)概念： 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的 组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜 的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 (二)原理：细胞增殖

(三)过程①原代培养动物组织消化后的初次培养 特点：单层贴壁生长 要求： 培养瓶或培养皿的内表 面光滑、无毒、易于贴附

动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官

剪碎、胰蛋白酶处理 单个细胞 加培养液稀释 原 细胞悬液

②传代培养

代 转入培养瓶 培 胰蛋白酶处理 养 传 代 培 养

原代培养的细胞处于接触抑制后， 分瓶培养 用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁 上脱离下来，然后加入新的培养 10代细胞 液，将细胞分离稀释，并从原培 养瓶内转接到新的培养瓶内，这 40-50代细胞 个过程称传代培养。(分瓶培养 的过程) 无限传代

细 胞 株

细 胞 系

1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动 物细胞培养材料？细胞生命力旺盛，分化程度低，分裂能力强。

2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？(1)扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。 (2)解除接触抑制

3、为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4,胃蛋白酶PH为2,会失 活。胰蛋白酶PH为7.2-8.4。

4、用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。

5、为什么要制成细胞悬液？因为动物细胞培养用的是液体培养基

6、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样 终培养成新个体？为什么？不能。动物体细胞不具有全能性。 动物细胞培养的结果：使细胞数目增多。

最

7、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的 主要区别是什么？传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞 核型可能发生变化(遗传物质可能改变) 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传 物质已经改变，等同于癌细胞。 ▲细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不 会发生改变，叫细胞株。 ▲细胞系：传代50代以后不能再传

下去，部分细胞遗传物质 发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。

(四)动物细胞培养的条件:1、无菌、无毒的环境对培养液和所有培养用具无菌处理； 培养液中添加抗生素防止培养过程中污染； 定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。

2、营养 液体合成培养基(葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生 长因子、微量元素等),通常还需加入血浆、血清 等天然成分。 能否用胃蛋白酶 3、温度和pH

温度36.5±0.5度，pH7.2~7.44、气体环境

代替胰蛋白酶？

95%空气和5% CO2 O2是细胞代谢所必需的。 CO2维持培养液的pH。

(五)动物细胞培养技术的应用:1.蛋白质生物制品的生产

病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.应用于基因工程

主要用于作为受体细胞3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 筛选抗癌药物

植物组织培养和动物细胞培养的比较：比较项目 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 取材 其他条件 植物组织培养 动物细胞培养

细胞的全能性 固体培养基 蔗糖 植物激素 植物体 快速繁殖、培育 无病毒植株 植物幼嫩部分或 花药 无菌无毒，适宜 条件

细胞增殖 液体培养基 葡萄糖、动物血清 细胞株、细胞系 获得细胞或细胞分 泌蛋白 胚胎或幼龄动物的 器官或组织 无菌无毒，适宜 条件

二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、定义： 动物核移植是将动物的一个细胞 的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母 细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这 个新的胚胎最终发育为动物个体.

2、原理： 动物细胞核具有全能性胚胎细胞分化程 度低，恢复其全 能性相对容易。 动物体细胞分化 程度高，恢复其 全能性十分困难

3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。

4、核移植流程供体：优良性状◆取供体细胞

受体：普通奶牛(卵 母细胞的采集与培养)◆用的是去

传代培养10代 以内的细胞. 为什么？

◆激活方法：

核的减数 1.体积大，易 第二次分 操作。2.含有 裂中期细 促使细胞核表 胞(MⅡ中 达全能性的物 期)为什 质和营养条件。 么？◆胚胎移植至 ◆促融方法：

◆激活目的：

代孕受体内

电刺激

妊娠、分娩

◆特别注意：克 隆动物性状与供 体动物完全一样 吗？ 不可能！因为：

供体细胞 (供核) 细胞培养 体细胞注入

卵母细胞 MⅡ中期 去核 无核卵母细胞

一、供体动物只提供 细胞核，而细胞质中 的遗传物质(如线粒 体DNA)来自于受体 卵母细胞.

重组细胞早期胚 胎培养

二、生物的性状不仅与遗传 物质有关，还受环境的影响。新个体

重组胚胎胚

胎 移植

代孕母体

核移植流程:

1、供体细胞的采集与培养2、受体卵母细胞的采集与体外培养

3、显微操作去除卵母细胞中的核4、将供体细胞注入去核卵母细胞 5、用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减 数分裂进程。 6电刺激促融使供体核进入受体卵母细胞，构建重 组胚胎。 7、胚胎移植入代孕母牛体内 8、妊娠分娩与供体遗传物质基础相同的犊牛。

5.体细胞核移植技术的应用前景

5.体细胞核移植技术存在的问题

看书P49-50页