组培培养基实验问答 文档(3)

32.请问：（１）接种前，接种工具要浸泡在酒精中，所使用的酒精浓度该是多少，是75%还是95%？（２）我用新铁炮百合鳞片作外植体，对鳞片切割有没讲究什么方法，可以减少污染，书上讲根据极性方向接种到培养基上，怎么判断极性呢？（３）使用玻璃瓶＋不诱钢的盖子作为培养容器，透气性是不是不好，会影响培养效果吗？

答:接种工具接种灼烧前浸泡酒精的浓度，可以是75%也可以是95%的。至于极性指的就是植物材料有趋向发育的特征。比如是茎繁，靠近茎顶端发出芽子，远离顶端会长出根。是根繁的话，新芽发生于近心端，新根发生于远心端。因此在接种时，尽量不要使材料倒置，尽量保持植物的极性方位，不能将茎端插入培养基内。培养容器的透气性是决定瓶内湿度和气体状况的主要因素，因此如果过于密封，使瓶内外得不到气体交换，就会不同程度的受到影响。

33.有什么方法可以是悬浮培养的植物细胞分散开,形成单细胞？

答:首先选择一块外观疏松、容易碎裂、生长快的浅色愈伤组织，用接种器具简单粉碎后，放到液体培养基中震荡培养，经过1－2周的培养后，悬浮液中既有游离的单细胞，又有较易破碎的细胞团，也有大的愈伤组织块。为了提高培养物中单细胞的比例，在继代培养时，需要用细口的移液管或注射器，只吸出游离的单细胞或小的细胞团来接种。必要时可加入少量果胶酶，培养基中和瓶壁上会有大量的单细胞和小细胞团，把他们收集后，转移到新鲜培养基中，放到摇床上再次继代培养。

也可将第一代细胞悬浮液停止震荡使大的细胞块和组织沉淀于容器底部，取上部悬浮液进行接种，或在无菌条件下用纱布、不锈钢网过滤，用滤液接种。对于分散性不好的材料，经过多次转接后，分散程度会大大提高。

34.生化培养箱可以进行什么培养，可以进行植物组织培养吗？它与光照培养箱有什么不同？

答:光照培养箱主要是模拟植物的光照条件，更适合植物的培养、种子发芽等的实验，而生化培养箱更偏重于温度、湿度的控制，微生物实验等比较合适。

35.高压灭菌后培养基的PH会变大还是变小？MS和1/2MS那种培养基PH变化大？ 答:培养基灭菌后PH会降低0.2左右，其主要原因就是有机物的分解，特别是维生素、氨基酸和糖，因此MS会比1/2MS变化要大。

36.内生菌造成的污染在外观上怎么辨别？

答:内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官的细胞

组培实验遇到的常规问题

间隙或细胞内的细菌，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接产生扩增出微生物DNA的方法来证明其内生。

在植物组织培养中，由于材料内部的内生细菌不能被一般的表面消毒方法所清除，随着材料带入培养过程，从而引起组培中的污染，称为内生细菌污染。

从污染状态来看，是发生于植物材料周围，一般会由培养基内向外延展，并且发生的时间也会比接触性污染要长，接触性的细菌一般在2－4天表现，内生菌则会超过4天，并且菌的种类也相对单一。