组培培养基实验问答 文档(2)

组培实验遇到的常规问题

物特性（顶端优势，萌蘖能力等）确定组培发生方式。4、小量无菌外植体系的建立，确定高效外植体获得方法。5、大量外植体群体建立，诱导分化配方设计。6、确定最好分化继代配方。6、继代扩繁。7、生根配方设计与确定。8、试管苗出瓶。9、大田栽植，观察组培苗生物学性状，与母本比较鉴别，确定优良性状的遗传稳定性。10、工厂化繁殖，市场化运作。

14.做无毒苗的快繁,一直找不到合适的培养基,能不能帮我推荐一种?

答:关于组培快繁的方式概括起来有下边三种途径：

1、外植体－愈伤组织－再生芽－继代－生根－出苗

2、外植体－丛生芽－继代－生根－出苗

3、外植体－生长量－切断继代－生根－出苗

至于采取那种途径，需要彻底了解所组培植物的生物学习性，包括繁殖方式，顶端优势，萌孽生根能力等等。

15.初代培养时,外植体出现发白,慢慢枯死,是什么原因的?

答:外植体的初代培养出现这种情况，是比较好理解的。大田植物材料离体以后，进入不同环境中继续生存代谢，需要一个过渡。首先，植物材料要吸收培养基的养分，不再是根吸收，盐类浓度相对于离体的植物材料的吸收能力可能是过量的，植物材料退色就是叶绿素形成受阻和细胞代谢受阻，另外还有培养基养分供应的有效性滞后，另外还有植物材料本身内含物向培养基的流失等等。建议在初代培养阶段最好先采用空白培养。

16.75%的酒精和70%的酒精有什么区别，组培时用那种好?

答:酒精的70%和75%都是可以的，但往往由于桶装酒精的浓度达不到95%，这样按照70%的配制就达不到要求了，因此我们一般是桶装按照75%的配，瓶装则用70%的配。

17.大型灭菌器在灭菌的时候总会出现个别瓶子破裂的现象，请教是什么原因？是温度过高，压力过大，还是内部冷热不均造成的呢？

答:高压灭菌造成玻璃瓶的破裂，特别是大型灭菌装置，我想最主要还是在放气冷却时造成的。究其原因，应该是在放气时，由于容积较大，压力在不同位置（内外部）的变化速度并不相同，致使瓶内与瓶外的压力差距较大，如果是封口膜，表现的可能就是塑料膜的破裂。

18.做培养基时可以用自来水吗。稀释药剂可以用吗。可以用砂糖吗。我看不懂培养基用量表。谢谢解答。主要是换算。如ms培养基硝酸钾用量1650mg，碘化钾0.025mg，甘胺酸0.0001mg。1mg，1l，1g到底是多少。我个人想自己做ms。没有分析天平。怎么办。

答:在实际生产中，自来水经过简单处理就可以作为组培用水。但若配药就需要用蒸馏水或纯净水。大量元素母液的配制可以根据实际需要进行选择倍数，比如硝酸钾用量1650mg/L，如配成20倍，就需称1.650*20=33g，以此类推，按照正确顺序溶解定溶到1L即可，配培养基时量取的体积就是1000/20=50ml，依次推算即可。

另外，如果您的配药条件不是很好，我建议可以应用干粉培养基，这样可以节省很多投资和时间。

19.水解酪蛋白有酸水解，有酶水解，在使用过程中有没有区别，他们的在培养基中的作用是一样的吗？

组培实验遇到的常规问题

答:水解酪蛋白（CH)和水解乳蛋白（LH)是多种氨基酸的混合物，对胚状体、不定芽的分化有良好的促进作用，通常用量在500mg/L，特别是当有高水平IAA存在时更是如此。 对于酪蛋白不管是酸解还是酶解，作用都是一样的，但考虑到组培苗的异养功能，酸解应该更有利于发挥其作用。

20.在初代培养阶段,成功地诱导出绿色的愈伤组织.进行继代培养时,愈伤组织块增殖很快,但始终没有芽出现.请问:怎样解决不产生不定芽的问题?

答:愈伤组织诱导成功后，如何有效地诱导出不定芽是相当重要的。外植体产生愈伤组织到的时间和愈伤生长的程度，随不同植物种类和培养条件有较大的差异。有些植物形成不定芽比较容易，能够直接从外植体受伤的或没有受伤的部位分化出不定芽。

一般认为细胞分裂素/生长素的比值是控制器官发生的重要因素，调整他们的适当比值就可以有效的控制愈伤组织的芽、根等器官的分化。在此理论下，愈伤组织诱导不定芽的能力，与愈伤组织的状态密切相关，能够诱导形成分生细胞团至关重要，分生细胞排列较为规律，较大的在外，越向内细胞越小，排列也越紧密，细胞质浓厚，核相对较大，这样的分生细胞在激素比值调控的情况下，就很容易形成不定芽。这也就是为什么在愈伤继代的时候要交替使用不同激素的原因。

大量繁殖愈伤组织接着再生苗似乎是个理想的方法，但重复的继代培养使许多愈伤组织再生苗的能力渐弱甚至丧失，同时愈伤组织再生苗变异率的增加，使得这种方法在生产中只能用于少数植物。

总之，对于这个问题除了化学调控的因素还有物理方面的原因，还有很多问题限于篇幅不再赘述。

21.NAA和2，4-D哪个生长素促进愈伤诱导效果好一点？

答:对于愈伤诱导和增殖来说，2，4－D效果要比NAA明显，但有一个问题，很多情况下，2，4－D诱导的愈伤比较难以再生芽。

22.灭完菌，凝固好的培养基，上面总有一层水．请教老师之所以这样，是因为配置培养基时哪里*作不当了吗？如果将植物材料转接于这样的培养基中，会导致整瓶苗玻璃化吗？或者出现其他怎样的后果呢？

答:培养基灭过菌后或多或少会有积水现象，一般来说冬天要轻一些。如果积水太多接种的时候倒出来，不然容易造成容器壁水珠比较多，影响光照，从而造成玻璃化现象加重。

23.洋葱加在培养基中，除了杀菌还有别的什么作用？

答:洋葱加在培养基，作用除了抑菌之外，其含有的丰富化学成分，与其他有机附加物的作用是差不多的。在种子发芽试验中加入激素，造成变异的几率很低，可以不予考虑。

24.有些树种受伤后会分泌出一些白色的浆液，比如梓叶槭，不管是茎段还是叶片，只要有伤口的地方都会有浆液，而这会加重外植体的褐化，请问应该怎么处理呢？

答:这是植物的伤流现象。由于伤流液中含有酚类物质，因此在培养中极易引起褐变。许多研究表明，选择适当的外植体和培养条件是克服褐变的最主要手段。通常外植体应有较强的分生能力，在最适宜的细胞脱分化和再分化培养条件下，使外植体处于旺盛的生长状态，便可大大减轻褐变。适宜的温度和在全黑暗条件下进行培养也可显著减小外植体的褐变。 液体培养和连续转接也是很好的措施。另外，加入一些氧化剂或用抗氧化剂进行材料（外植体）的预处理或预培养，可大大减轻醌类物质的毒害。这些抗氧化剂包括：VC、柠檬酸、

组培实验遇到的常规问题

硫代硫酸钠（Na2S2O3）等。此外，0.1％-0.5％活性炭对吸附酚类氧化物的效果也很明显。

25.在组培中，叶片较易脱落，会是什么原因引起的呢？

答:叶片脱落是对逆境的一种表现，温度过高，透气不良，培养物过于密集，久不转移，有害气体积累（乙烯、氨气、甲醛）等会引起植物材料的落叶或黄化。

26.空白培养是什么意思？

答:空白培养在高效外植体系的建立方面是很有用的步骤，空白培养就是不加任何激素的培养过程。对于外植体迅速适应瓶内环境和有效外植体群体的建立是很有用的。

27.如果芽体只是长高,不膨大也不分化,有的静止不动,请问这会是什么原因引起的呢?

答:成活外植体如何成功启动是组培过程中至关重要的环节之一。由于大田植物材料其激素水平和细胞活性差距较大，如何迅速将外植体对培养基条件 …… 此处隐藏：3036字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……