USP29-2s 61-非无菌产品的微生物检查：微生物的计数检查 中文译(2)

(1) An increase in the volume of the diluent or culture medium; 增加稀释剂或培养基的体积；

(2) Incorporation of a specific or general neutralizing agents into the diluent; 在稀释剂中加入特定或通用中和剂； (3) Membrane filtration; or 薄膜过滤；或

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(4) A combination of the above measures. 联合上述措施

中和剂—中和剂可以用来中和抗菌剂的活性（见表2）。最好能在灭菌前将其加到所选的稀释剂或培养基中。如果使用它们，必须进行一个有中和剂无产品的空白试验来证明其对微生物的有效性和无毒性。

表2. 干扰物的常用中和剂/中和方法

抗菌活性。此信息可以说明本品或许没有被给出类型的微生物污染。但是，也有可能是产品仅抑制此处说明的某些微生物，但是并不抑制其它菌株，而这些菌株并不包括在试验菌株。那么，则用与微生物生长和规定的验收标准相容的最高稀释因子进行试验。

药品中微生物的回收

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对列出的每种微生物进行分离试验。只对所加的试验菌株进行计数。 薄膜过滤—使用标称孔径不超过0.45 um的薄膜过滤器。选择过滤材质的类型，其截留细菌能力应不被供试品的组份所影响。对于列出的每种微生物，使用一个薄膜过滤器。

将按样品的制备、接种与稀释和抑菌活性的中和/去除所述制备的适量样品移入薄膜过滤器中，立即过滤，并用适当体积的稀释剂冲洗薄膜过滤器。

为了确定好氧微生物的总数（TAMC），将薄膜过滤器的移到大豆-酪蛋白消化琼脂表面上。为了确定酵母菌和霉菌总数（TYMC），将薄膜转移到沙氏葡萄糖琼脂表面上。按表1所述培养平板，进行计数。

平板计数法—对每种培养基执行平板计数法时至少重复一次，使用平均计数结果。

平板计数法—在直径9cm的培养皿中，加入按照样品的制备、接种与稀释和抑菌活性的中和/去除所述制备的样品1mL，以及15到20mL的大豆-酪蛋白消化琼脂或沙氏葡萄糖琼脂，保持两种培养基温度均不超过45°。如果使用更大的培养皿，则相应增加培养基的量。对于表1中列出的各种微生物，至少使用两个培养皿。

按表1所述培养平板。采用每种培养基计数的算数平均值，并计算原始接种物的cfu数。

表面铺展法—对于直径9cm的培养皿，在每个培养皿加入约45°的15到20mL的大豆-酪蛋白消化琼脂或沙氏葡萄糖琼脂，使其凝固。如果使用更大的培养皿，相应增加琼脂的量。在层流柜或培养箱中使平板干燥。表1中列出的每种微生物，至少用两个培养皿。将已测体积，不少于0.1mL的样品铺展到培养基表面上，样品是按照

样品的制备、接种与稀释和抑菌活性的中和/去除所述制备的。按倾注培养法所述培养并计数。

最大机率（MPN）法—MPN法的精密度和准确性要比薄膜过滤法或平板计数法低。计霉菌数得到的结果尤其不可信。因此，保留MPN法仅在无其它可用方法时对TAMC计数。如果所用方法判定，按如下进行。

制备一系列，至少三个10倍系列稀释的按照样品的制备、接种与稀释和抑菌活

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性的中和/去除所述制备的样品。从每个级别的稀释液中，取1g或1mL接种到三个含有9到10mL的大豆-酪蛋白消化肉汤的试管中。如有必要，可以在培养基中加入类似聚山梨醇酯80的表面活性剂或抑菌因子灭活剂。因此，如果制备了三个稀释度，就要接种9个试管。

所有试管在30° 到35°培养不超过3天。如果由于供试品特性而导致读出结果困难或不确定，则在同种肉汤或大豆-酪蛋白消化琼脂上以相同的温度再次培养1到2天，并使用此次结果。从表3中，确定每克或每毫升供试品中微生物的最可能数。

表3 . 微生物的最可能数值

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验证薄膜过滤法或平板计数法的适用性时，任何试验菌计数的平均值与接种与

稀释中定义的不含产品的对照值不得有大于2的差值。验证MPN法的适用性时，接种物的计算值必须在用对照得到结果的置信限度的95%内。

如果用所述任一方法检测的多个微生物中有一个达不到以上标准，那么使用更接近于标准的方法和试验条件来测试产品。

产品检测

用于试验的数量

除非特别指定，否则取10或10mL供试品按上面所述小心进行检测。对于烟雾剂中的液体或固体，抽取10个包装的样品。对于透皮贴剂，取10贴样品。

对于将在下述条件下按配方制造的活性成分，试验量可以减少：每个剂量单位（如片剂、胶囊、注射剂）中（活性成分）的数量小于或等于1mg的，或者每g或每ml（对于不用剂量单位表示的制剂）的量小于1mg。在这些情况下，检测样品的量不能小于10个剂量单位，或10g或10mL的产品。

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在样品量有限或批量非常小（例如小于1000mL或1000g）时，用作活性成分的物质的试验量应当是批量的1%，除非规定或者经过证明和批准用更少的量。

对于一批总数小于200的产品（如，用于临床试验的样品），取样量可以减少到2个单位，数量少于100的可为1个单位。

从散装物料或制剂的可用容器中随机抽取样品。为了获得必需的量，可以将足够数容器的内含物混合以提供样品。

产品检查 薄膜过滤

使用一硝化装置，其设计允许过滤器转移到培养基上。用适当的方法来制备样品，此方法在促生长实验和计数方法的适用性中已被证明其适用性，转移适量到每个膜过滤器上，并立即过滤。遵循适当规程清洗每个过滤器。

测定TAMC时，将一个薄膜过滤器转移到大豆-酪蛋白消化琼脂上面。测定TYMC时，将另一个薄膜转移到沙氏葡萄糖琼脂上面。在30° 到 35°培养大豆-酪蛋白消化琼脂平板3到5天，在20° 到 25°培养沙氏葡萄糖琼脂平板5到7天。计算每g或每mL产品的cfu数。

检查透皮贴剂时，分别用两个无菌过滤膜过滤10%的样品制备所述的制备品。将一片薄膜转移到大豆-酪蛋白消化琼脂上计算TAMC，另一片转移到沙氏葡萄糖琼脂上计算TYMC。

平板计数法

倾注平板法—用适当的方法来制备样品，此方法在促生长实验和计数方法的适用性中已被证明其适用性。每种培养基每个稀释度至少制备2个培养皿。在30° 到 35°培养大豆-酪蛋白消化琼脂平板3到5天，在20° 到 25°培养沙氏葡萄糖琼脂平板5到7天。选择与给定的稀释相一致且显示TAMC最高菌落数小于250，TYMV小于50的平板。取每个培养基计数的算数平均值，并计算每g或每mL产品的cfu值。

表面铺展法—用适当的方法来制备样品，此方法在促生长实验和计数方法的适用性中已被证明其适用性。每种培养基每个稀释度至少制备2个培养皿。按照倾注平板法中所述培养并计算cfu数。

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最大机率法

用适当的方法来制备并稀释样品，此方法在促生长实验和计数方法的适用性中已被证明其适用性。将所有试管在30° 到 35°培养3到5天。如需要，用适当的规程进行次培养。记录每个稀释度下显示微生物生长的试管数。根据表3来确定每g或每ml供试品中微生物的最可能的数量。

结果判断

可认为好氧微生物的总数（TAMC）等同于用大豆-酪蛋白消化琼脂法得到的cfu数；如果在培养基中检出真菌的菌落，则将其作为部分TAMC进行计算。可认为酵母菌和霉菌的总数（TYMC）等于用沙氏葡萄糖琼脂法得到的cfu数，如果在此培养基中检出细菌的菌落，则将其作为部分TYMC进行计算。如果因为细菌生长而导致TYMC超出验收标准时，则可以使用含有抗生素的沙氏葡萄糖琼 …… 此处隐藏：2222字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……