Folin_Ciocalteu比色法测定枳椇果梗多酚含量

210 2011, Vol. 32, No. 14

食品科学※分析检测

Folin-Ciocalteu比色法测定枳椇果梗多酚含量

向进乐1,2，李志西1,*，郭香凤2，李 欢1，郑淑彦1

(1.西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西 杨凌 712100；

2.河南科技大学食品与生物工程学院，河南 洛阳 471003)

摘　　　要：以没食子酸为标样，研究Folin-Ciocalteu比色法测定枳椇果梗总酚含量的适宜条件。结果表明，枳椇果梗提取物加Folin-Ciocalteu试剂0.6mL、20g/100mL Na2CO3溶液1.5mL，定容至10mL，30℃避光反应60min，测定反应体系在750nm处的吸光度，多酚质量浓度在0～8.47mg/L范围内与吸光度有良好的线性关系。该方法的稳定性、重现性、精密度以及加标回收率的相对标准偏差均符合要求，可用于枳椇果梗多酚含量的测定。关键词：Folin-Ciocalteu法；枳椇果梗；多酚

Folin-Ciocalteu colorimetric Determination of Total Polyphenol Content in Hovenia acerba Fruit

XIANG Jin-le1,2，LI Zhi-xi1,*，GUO Xiang-feng2，LI-Huan1，ZHENG Shu-yan1

(1. College of Food Science and Engineering, Northwest A & F University, Yangling 712100, China；2. College of Food and Bioengineering, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China)Abstract：A quantitative Folin-Ciocalteu colorimetry method to determine total polyphenols in Hovenia acerba fruit wasdeveloped. The color reaction was carried out with 0.6 mL of Folin-Ciocalteu reagent and 1.5 mL of 20 g/100 mL aqueousNa2CO3 solution in darkness at 30 ℃ for 60 min. The detection wavelength was set as 750 nm. The linear range of the establishedstandard curve was 0－8.47 mg/L. The relative standard deviations of stability, reproducibility, precision, and spikerecovery rate of this method were all satisfactory. Thus, this method can be applicable to determine the total polyphenols ofHovenia acerba fruit.

Key words：Folin-Ciocalteu colorimetry；Hovenia acerba fruit；polyphenol

中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)14-0210-05

枳椇为鼠李科枳椇属(Hovenia thunb)植物，又称拐枣、鸡柤子、半甜夜。全世界有三个种，两个变种。我国除东北三省、内蒙古、新疆、宁夏、青海和台湾外，其余各省区均有分布。枳椇属植物始载于《唐本草》，以果实、木汁、木皮入药，现由《中国人民共和国卫生部药品标准 中药材》收载[1]。枳椇属植物多以枳椇子入药，即枳椇干燥成熟的种子，关于枳椇子生物活性成分和生理功能及其作用机制等方面已有诸多报道[1-2]。而关于肉质肥大扭曲、酸甜的枳椇果梗的研究开发鲜见报道，这可能与其个体小、外形扭曲、残渣多、适口性差有关。

目前，国内报道的枳椇果梗初级加工制品有枳椇果汁饮料[3-6]、果酒[7]、果醋[8]和酸乳[9]等产品。本课题组[10]以枳椇果梗为原料，采用液态深层发酵法酿制出

收稿日期：2010-10-25

基金项目：国家级大学生科技创新资助项目(091071202)

风味独特的枳椇果梗酒、果醋，并对枳椇醋的保健功能进行初步研究。发现枳椇醋具有较强的体外抗氧化作用、良好的减肥降脂作用，对急性酒精中毒以及由酒精引起的慢性肝损伤也有很好的预防作用。邹礼根等[11]也发现枳椇果梗水提物具有一定的解酒效果。

对枳椇果梗的化学成分研究也有少量报道。符树根[3]、江庆中[4]等对枳椇果梗和种子质量所占比例和基本化学组成进行研究，枳椇果梗约占总质量的90%，两者基本化学组成差异很大。鲜果梗中含有大量糖分、有机酸、氨基酸和维生素等，其中总糖含量35.13%、还原糖17.23%、总酸390mg/100g、VC 44mg/100g。贾春晓等[12]通过气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)对枳椇果梗中有机酸进行分析，鉴定出19种有机酸，其中苹果酸的含量最高，

作者简介：向进乐(1980—)，男，讲师，博士研究生，主要从事植物活性成分研究。E-mail：xiangjinlexinong@http://www.77cn.com.cn*通信作者：李志西(1958—)，男，教授，博士，主要从事发酵功能食品研究。E-mail：lizhxi@http://www.77cn.com.cn

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占22.88%；枳椇果梗还含有多种不饱和高级脂肪酸，其中亚麻酸和亚油酸含量分别为5.06%和3.35%。朱炯波等[13]采用蒽酮硫酸比色法对枳椇果梗多糖含量进行分析，枳椇果梗中多糖为13.83%。Yoo等[14]以枳椇果实为原料通过水提、有机溶剂萃取和低压制备色谱技术分离制备出高纯度的二氢杨梅素。

多酚是植物原料的一种重要次生代谢产物，是绝大多数植物性食品和药材的活性成分。枳椇果中含有二氢杨梅素等酚类物质[14-15]，但枳椇果梗多酚含量测定的方法尚未见报道。植物多酚含量测定方法较多，包括滴定法、比色法等[16]。Folin-Ciocalteu比色法是Folin-Denis的改进，是目前测定植物多酚含量的最常用方法，但目前报道的不同原料多酚含量测定条件，如检测波长、Folin-Ciocalteu试剂用量、碱液加入量以及显色温度和时间等都有较大差异[16-17]。本研究拟建立Folin-Ciocalteu法测定枳椇果梗多酚含量的适宜条件，以期为枳椇果的进一步研究开发提供参考依据。1材料与方法

1.1

材料与试剂

枳椇果 采自西安市临潼区龙河西岸南姚村；没食

子酸(纯度≥98%) 成都曼斯特生物科技有限公司；Folin-Ciocalteu试剂 上海荔达生物科技有限公司；甲醇、Na2CO3等常规试剂均为分析纯。1.2

仪器与设备

UV-2550双光束紫外分光光度计、UVmini 1240单孔

紫外分光光度计 日本岛津公司；旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；KH5200B超声清洗机 昆山禾创超声设备有限公司；电子天平 北京塞多利斯天平有限公司；电热恒温水浴锅 北京科伟永兴仪器有限公司；移液器上海大龙医疗设备有限公司。1.3方法

1.3.1

对照品溶液与样品溶液的制备

对照品溶液配制：精密称取没食子酸对照品12.1mg加甲醇溶解定容至100mL，得质量浓度121mg/L没食子酸标准溶液。

枳椇果梗多酚溶液的制备：参考吕群金等[18]的方法略有改动。称取干燥的枳椇果梗粉末1.0g加入40mL 70%甲醇溶液，40℃超声提取30min，过滤得滤液。滤渣加入30mL 70%甲醇溶液重复提取2次，合并滤液，减压浓缩定容至25mL作为枳椇果梗多酚样品溶液。1.3.2Folin-Ciocalteu法比色条件的选择1.3.2.1

检测波长的选取[16]

取没食子酸标准溶液和枳椇果梗样品溶液各0.1mL，分别加蒸馏水稀释，加0.5mL Folin-Ciocalteu试剂混匀，

3min后加入1.5mL 20g/100mL Na2CO3溶液，加水定容至10mL，室温避光反应120min，以空白为对照，在500～900nm范围内扫描确定最大吸收波长。1.3.2.2

显色温度和时间的确定[17]

分别取对照品溶液和枳椇果梗样品溶液0.25mL于25mL容量瓶中，加水稀释，加入Folin-Ciocalteu试剂1.25mL混匀，3min后加入20g/100mL Na2CO3溶液3.75mL，加水定容，将各比色试剂混合均匀后，分别于25、30、35、40、45℃条件下水浴避光反应，分别于30、60、90、120、150min时测定吸光度，以 …… 此处隐藏：9498字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……