枯草芽孢杆菌B_subtilisCNMC__省略_酶_培养基组分及培养条件对酶

微生物论文材料

※生物工程食品科学2008, Vol. 29, No. 05

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Ｎｅｕｔｒａｌ　Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｉｎＳｔｉｒｒｅｄ　Ｔａｎｋ　Ｒｅａｃｔｏｒ　Ｕｓｉｎｇ　Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ＣＮＭＣ－００１４：

Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｕｍ　Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｎＥｎｚｙｍｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ

ＸＩＡＯ　Ｈｕａｉ－ｑｉｕ，ＬＩ　Ｙｕ－ｚｈｅｎ，ＬＡＮ　Ｌｉ－ｘｉｎ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ｈｕｎａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｖｏｃａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，　Ｚｈｕｚｈｏｕ　　　　　　４１２００４，　Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　：Ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｎｅｕｔｒａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＮＰＲ）　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ＣＮＭＣ－００１４　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｕｓｉｎｇｓｔａｓｔｉｃａｌｌｙ－ｂａｓｅｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｄｅｓｉｇｎｓ．　Ａ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ（ＳＦＥ）　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｃｈｏｏｓｅ　ｔｈｅ　ｃａｒｂｏｎ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｆｌｕｃｉｎｇ　ＮＰＲ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．　Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｓｉｘ　ｖａｒｉａｂｌｅｓ　ｏｆ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｗｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ，　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｖａｒｉａｂｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔａｓｔｉｃａｌｌｙ　ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ　ｆｏｒ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ，　ａｎｄ　ｉｎｃｌｕｄｅｄ　ｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｃｏｒｎ　ｆｌｏｕｒ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＮＰＲｏｆ　３９５５．１６±２．１５　Ｕ／ｍｌ　ａｎｄ　３９３９．１５±１．８７　Ｕ／ｍｌ．　Ｆｏｒ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ，　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｖａｒｉａｂｌｅ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗａｓ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｆｌｏｕｒ　ｗｉｔｈ　ｍａｘｉｍｕｎ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　４３１８．１２±５．６６　Ｕ／ｍｌ．　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｖａｒｉａｂｌｅ　ｗａｓ　ｔｈｅｎ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｒａｎｇｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　（ＲＡ）　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　（ＡＮＯＶＡ），　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｎ　ｖａｌｕｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｒｉｔｉｃａｌｎｕｔｒｉｅｎｔｓ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｎ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　２％　ｏｆ　ｃｏｒｎ　ｆｌｏｕｒ，　１％　ｏｆ　ｇｌｙｃｅｒｏｌ，　３％　ｏｆ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｆｌｏｕｒ　ａｎｄ　３％　ｏｆｂｒａｎ，　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｎ　ＮＰＲ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　４５２６．２８　Ｕ／ｍｌ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ，　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ，　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｃｌｙｃｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｃｏｒｎｆｌｏｕｒ　ｏｎ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｏｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｔ　５　％　（ｐ＜０．０５）　ｌｅｖｅｌ，　ｂｕｔ，　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｆｌｏｕｒ　ｗａｓ　ｍｏｓｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｔ　１　％（ｐ＜０．０１）　ａｎｄ　ｂｒａｎ　ｈａｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　（ｐ＞０．０５）　ｏｎ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．　Ａｎｄ　ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ，ｄｉｓｓｏｌｕｂｌｅ　ｏｘｙｇｅｎ　（ＤＯ），　ｉｎｉｔｉａｌ　ｐＨ，　ｓｔｒａｉｎ　ａｇｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｏｃｕｌｕｍ　ｓｉｚｅｓ　ｏｎ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．　Ｒｅｓｕｌｓｔｓ　ｓｈｏｗｎｔｈａｔ　Ｃａ２＋，　Ｍｇ２＋，　Ｎａ＋，　Ｚｎ＋，　Ｍｎ２＋　ｃｏｕｌｄ　ａｃｔｉｖａｔｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｖｅｌｓ，　ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　Ｃａ２＋　ｗｉｔｈ　ａ　ｍａｘｉｍｕｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ　４５５２．９７　Ｕ／ｍｌ．　Ａｎｄ　ｗｈｅｎａｓ，　Ｆｅ３＋，　Ｆｅ２＋，　Ｋ＋，　Ａｇ＋　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｎ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，　ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ　Ａｇ＋　（ＮＰＲａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｏｎｌｙ　９８７．４６　Ｕ／ｍｌ）．Ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｉｌｌｅｄ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ＳｍＦ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　３００　ｍｌ　Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ　ｆｌａｓｋ　ｗａｓ　５０　ｍｌ．　ＯｐｔｉｍａｌｐＨ　ｗａｓ　７．５，　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｓｔｒａｉｎ　ａｇｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｏｃｕｌｕｍ　ｓｉｚｅｓ　ｆｏｒ　ｍａｘｉｍｕｎ　ＮＰＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　２４－ｈ－ｏｌｄ　ｓｔｒａｉｎ　ａｎｄ　３％　ｃｕｌｔｕｒｅｂｒｏｔｈ，　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｎｅｕｔｒａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　（ＮＰＲ）；Ｂ．　ｓｕｂｔｉｌｉｓ；ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　（ＳｍＦ）；ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ（ＳＦＥ），ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ（ＡＮＯＶＡ）；ｒａｎｇｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ（ＲＡ）

枯草芽孢杆菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ＣＮＭＣ－００１４深层摇瓶发酵生产中性蛋白酶　—培养基组分及培养条件对酶生物合成的影响

肖怀秋，李玉珍，兰立新

（湖南化工职业技术学院应用化学系，湖南　株洲　　　　　　４１２００４）

摘　　　要：应用统计学方法优化了Ｂ．ｓｕｓｔｉｌｉｓ　ＣＮＭＣ－００１４中性蛋白酶产生的培养基组分。单因素试验研究发现，在测试的６种碳源中，以甘油和玉米粉对产酶影响显著，酶活力分别达到了３９５５．１６±２．１５Ｕ／ｍｌ和３９３９．１５±　１．８７Ｕ／ｍｌ。氮源试验中发现，大豆粉对产酶影响最为显著，酶活力达到４３１８．１２±５．６６Ｕ／ｍｌ。通过极差分析与正交分析优化了培养基配比，优化方案为：２％玉米粉，１％甘油，３％玉米粉和３％麸皮。方差分析结果发现，甘油和玉米粉对产酶影响显著（ｐ＜０．０５），大豆粉对产酶极显著（ｐ＜０．０１），　麸皮对产酶影响不显著（ｐ＞０．０５）。同时，还

收稿日期：２００７－０６－２０

作者简介：肖怀秋（１９８１－），男，讲师，硕士研究生，主要从事制药方面的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａ …… 此处隐藏：22670字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……