生化制药技术毕业论文

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题 目 （部） 业

纳他霉素的分离纯化 制药与环境工程系 生化制药技术

系 专

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目 录

1、摘要 ............................................. - 1 - 2、引言 ............................................. - 3 - 3、正文 ............................................. - 4 - 3. 1 化学性质 ..................................... - 4 - 3. 2 纳他霉素的抑菌作用机制 ...................... - 5 - 3. 3纳他霉素的生产工艺 ............................ - 5 - 3. 4 纳他霉素的提取分离 ........................... - 5 - 3. 5 用途 ......................................... - 6 -

3. 5. 1食品中的应用 ..................................... - 6 -

3. 5. 2医学上的应用 ..................................... - 6 -

3. 6 纳他霉素的发展前景 .......................... - 7 - 3. 7 仪器与材料 .................................. - 7 -

3. 7. 1 仪器............................................. - 7 -

3. 8 方法与结果 .................................. - 8 -

3. 8. 1方法 ............................................. - 8 - 3 .8. 2 结果............................................. - 8 -

3. 9 发酵液预处理 ................................. - 8 - 3. 10 溶液PH值对纳他霉素溶出率的影响 ............. - 8 - 4、实验内容及步骤 ................................... - 9 - 4. 1 考察不同PH值下的水和甲醇洗涤初品，对重含提升的影响 .................................................. - 9 - 4. 2 考察PH对发酵液抽提的影响 ................... - 10 - 4. 3 考察不同甲醇盐溶液对发酵液抽提的影响 ........ - 11 - 4. 3 对照试验 .................................... - 12 -

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4. 4 重复淋洗和搅洗的区别 ........................ - 13 - 4.5 考察抽提时间对抽提效率的影响 ................. - 14 - 以及考察结晶物水洗对重含影响 ..................... - 14 - 4. 6 考察温度对抽提的影响 ........................ - 15 - 5、参考文献 ........................................ - 17 - 6、附录 ............................................ - 18 -

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1、 摘 要

目的 研究采用甲醇从发酵液中分离纯化得到纳他霉素的工艺，提高纳他

霉素成品质量，得到高纯度药用级纳他霉素。方法 用HPLC检测方法，以纳他霉素的洗脱液、固体、滤液为指标，考察用甲醇分离纯化纳他霉素的溶解性能和洗脱参数（单位★1及重含★2）。结果 纳他霉素含有4个相连的双键结构，决定了纳他霉素几乎不溶于水，微溶于甲醇，溶于冰醇酸。由于纳他霉素的溶解特性，很多用于纳他霉素分离的工艺使用的容积量大，损耗大，成本高，很难实现规模化生产。加之，冰醇酸的制备工艺复杂，以及成本高，故采用甲醇溶液，从发酵液中提取所需产物。纳他霉素从发酵液中的最佳PH值是11；分离纯化纳他霉素成品纯度大于97%。结论 该高纯度药用级纳他霉素的规模化分离纯化方法为国内首次应用，工艺简单可靠，分离效果好，适用于工业化生产。 关键词：纳他霉素；大孔树脂；分离纯化 Abstract

Objective to study the isolation and purification of methanol from fermentation broth by natamycin process, improving myprozine finished product quality, high purity medicinal grade ofnatamycin. Methods HPLC detection method, with natamycin eluting liquid, solid, liquid as the index, is investigated by using the methanol purification of natamycin solubility and elution parameters. The results of natamycin comprising 4 connected double bond structure, determines the natamycin is almost insoluble in water, slightly soluble in methanol, dissolving Yu Bing alkyd.As a result of natamycin dissolution characteristics, many for natamycin separation process using volume big, loss is big, cost is high, it is difficult to realize large-scale production.In addition, ice alkyd complex preparation process, and the cost is high, so the use of methanol solution, extraction from fermentation liquid of required product.Natamycin from fermentation broth in the optimal pH value is 11; the separation and purification of natamycin finished more than 97% purity.Conclusion this high-purity for medicinal purposes level accepts his mildew element the formalization separation purification method for domestic to apply for the first time, craft simple reliable, the separation effect is good, is suitable for the industrialization production.

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Key word: Accepts his mildew element; Macroporous resin; Separation purification

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2、引 言

纳他霉素是一种多烯大环内脂类抗生素，成白色或乳白色，几乎无臭无味，自1955年被Struk等人发现以来，纳他霉素以其优越的抗霉菌、真菌效果，在食品防腐以及医药工业中已有广泛应用。1997年，我国卫生部正式批准纳他霉素用作食品防腐剂。

随着对纳他霉素发酵生产研究的不断深入，完善纳他霉素提取工艺就显得尤为重要。Olson等人利用纳他霉素在发酵液中的存在形式，调节PH到酸性除去菌体，在调节PH到中性，离心后得到纳他霉素，提取的纳他霉素纯度大于80%，但该工艺易产生纳他霉素甲酯；Raghoenath等人利用纳他霉素在发酵液中的存在形式，不加入有机溶剂，直接破碎生物量，然后通过重力梯度分离技术提取发酵液中的纳他霉素。该工艺的纳他霉素提取收率大于90%，纯度约70%。以上方法的共同点就是要求发酵液中的纳他霉素的浓度较高，一般约在10g/L的含量是最为适宜。但当那他霉素含量较低时，若采用以上这些方法则不能达到满意的提取效果。基于以上的考虑，本文这种研究了纳他霉素浓度在一般情况下（2g/L-5g/L）范围内的产品提取工艺，并采用HPLC图谱和生物活性检测法对提取产物进行了分析鉴定；该工艺能够把重含提高到95%，纯度也能上96%。此方法也正是我作为本次毕业论文的主题。

纳他霉素在水或低级醇中的溶解度差别很大，工业上常用甲醇等有机溶剂从发酵液中提取。但到目前为止，纳他霉素在水相中溶解度数据很难找到，在有机溶剂中的溶解度数据更是未见报道。此外，为减少有机溶剂残留于产品中队人体造成危害、对环境污染节约工业成本，应在提取过程中尽量减少有机溶剂的用量。初步筛选表明纳他霉素在甲醇中溶解效果最佳。因此，本工艺研究决定采用甲醇从发酵液中提取纳他霉素。

此外，由于本次提取需要用到大量甲醇，公司在研究过程中除了考虑环境角度以外，还从生产工人的人生安全出发，采用冷甲醇来进行提取。结果效果非常明显，效率也得到大大提高。

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3、正文