豆豉纤溶酶_一种潜在的新型溶栓药物

豆豉纤溶酶的分离纯化及研究进展

●知识介绍

文章编号：１０００－１３３６（２００５）０５－０４２７－０３

《生命的化学》２００５年２５卷５期

ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００５，２５（５）

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豆豉纤溶酶———一种潜在的新型溶栓药物

范晓丹郭勇

（华南理工大学生物科学与工程学院，广州５１０６４０）

摘要：豆豉纤溶酶是一种潜在的新型溶栓药物。该文介绍豆豉纤溶酶产生菌的筛选、诱变；纤溶酶的分离纯化、

酶学性质及其分子生物学的研究等；并简述了纤溶酶活性的测定方法；提出了豆豉纤溶酶的研究方向及前景。关键词：

豆豉纤溶酶；

诱变；

酶学性质；

分子生物学；

纤溶活性

中图分类号：Ｑ８１４

血栓栓塞疾病是当前危害人类健康，导致死亡率最高的疾病之一，如心肌梗塞、脑栓塞、肺栓塞等。目前治疗血栓栓塞疾病的最为有效并且可靠的手段是溶栓疗法。因此，世界各国都致力于溶栓药物的研究开发。

从传统大豆发酵食品中分离提取纤溶酶，是近年来溶血栓药物研究的新方向之一。自１９８７年，日本的须见洋行等［１］首先从日本纳豆食品中分离到一种具有强烈纤溶活性的酶，即纳豆激

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收稿日期：作者简介：

酶。随后人们从不同国家和地区的传统食品中又陆续发现了微生物的纤溶酶，如韩国传统食品

Ｃｈｕｎｇｋｏｏｋ－Ｊａｎｇ中的纤溶酶ＣＫ和ＳｕｂｔｉｌｉｓｉｎＤＪ－４。

我国研究人员从纳豆激酶研究得到启发，也开始把目光投向传统的大豆发酵食品。除了从台湾大豆发酵食品中发现的纤溶酶外，经研究发现，在豆豉、酱油等传统大豆发酵食品和调味品中，同样也可以分离出高纤溶活性的酶，其中分离自豆豉的纤溶酶具有很高的活性。豆豉纤溶酶不仅血栓溶解能力强，而且无毒副作用，不引起内出血，在体内半寿期长，是从传统食品中发现的新型纤溶酶，具有十分重要的开发价值。

２００５－０６－１４

范晓丹（１９８０—），女，博士，

Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａｏｄａｎｆ

＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ；郭勇（１９４２—），男，教授，博士生导师，联系作

者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｅｙｇｕｏ＠ｓｃｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ

１．

菌种的筛选及诱变

""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""

富勒烯的衍生物可以抑２．４其他生物学活性

制细胞凋亡。Ｈｕａｎｇ等［１０］实验证明，羧酸富勒烯的两种同分异构体通过中和ＴＧＦ－β诱导的氧自由基抑制肝肿瘤细胞Ｈｅｐ３Ｂ凋亡。羧酸富勒烯可以抑制对表皮细胞生长底物剥夺所致的失巢凋亡。研究表明，富勒烯衍生物抑制凋亡与其清除自由显著相关。在紫外光或者可见光照射下，富勒烯衍生物产生切割ＤＮＡ的活性也是一个重要生物学效应。通过合成特异性富勒烯寡核苷酸衍生物，从而序列特异性地切割ＤＮＡ，给基因组研究提供了广阔的应用前景

［１１］

的开发提供了崭新的思路。另外富勒稀衍生物还可以用于造影剂的研究，金属富勒烯的合成使富勒烯作为一种新的放射示踪剂成为可能。

参

［１］［２］［３］［４］［５］［６］

考文献

ＫｒｏｔｏＨｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１８：１６２—１６３

ＨｉｒｓｃｈＡｅｔａｌ．ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ，１９９８，３９：２７３１—２７３４ＪｉｎＨｅｔａｌ．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ，２０００，６２：６００—６０７

ＣｈｉａｎｇＹＹｅｔａｌ．ＪＣａｒｄｉｏｖａｓｃＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０００，３６：４２３—４２７ＦｒｉｅｄｍａｎＳＨｅｔａｌ．ＪＡｍＣｈｅｍＳｏｃ，１９９３，１１５：６５０６—６５０９ＲｕｂｉｎＹＩｎ：１９９６，２９５—３２８

ＡｎｄｒｅｏｎｉＷ（ｅｄ）．

ＴｈｅＣｈｅｍｉｃａｌＰｈｙｓｉｃｓｏｆ

Ｆｕｌｌｅｒｅｎｅｓ１０（ａｎｄ５）ＹｅａｒｓＬａｔｅｒ，ＫｌｕｗｅｒＡｃａｄｅｍｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒ，

。富勒烯衍生物还具有抑制

［７］［８］［９］

半胱氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的活性。富勒烯的这种活性可能与其特殊的疏水性、亲电性以及高还原电位有关，但是其机制尚未研究清楚。由于富勒烯复合物具有组织选择性，而且其毒性较小，当其注入血流中，可以迅速分布到各种组织，而且一周内几乎检测不到毒性的存在［１２］。利用富勒烯衍生物作为药物载体为器官靶向性药物

ＢｏｓｉＳｅｔａｌ．ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍＬｅｔｔ，２０００，１０：１０４３—１０４５ＴｓａｏＮｅｔａｌ．ＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００２，４９：６４１—６４９ＴｓａｏＮｅｔａｌ．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００１，４５：１７８８—１７９３

［１０］ＨｕａｎｇＹＬｅｔａｌ．ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ，１９９８，２５４：３８—４３［１１］ＨｉｇａｓｈｉＮｅｔａｌ．ＣｈｅｍＣｏｍｍｕｎ，１９９７，１５０７—１５０８［１２］ＱｉｎｇｎｕａｎＬｅｔａｌ．ＮｕｃｌＭｅｄＢｉｏｌ，２００２，２９：７０７—７１０

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《生命的化学》２００５年２５卷５期

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●ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓ

南京农业大学的董明盛等［２］从豆豉中分离到产纤溶酶的枯草芽孢杆菌，测得其发酵液的纤溶酶活性达到６８３．３ＩＵ／ｍＬ。江南大学齐海萍等［３］从

成纤溶酶；蛋白质测序结果显示，该酶Ｎ端２４个

氨基酸序列为ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＦＴＧＳ。进一步研究表明，该纤溶酶的理化性质和生物学功能与纳豆激酶相似，但是同源性分析表明，其基因和蛋白质序列与日本纳豆激酶相应序列分别仅有８０．０％和８６．５％的同源性，表明该酶可能是一种新型的溶栓酶。

１２个不同产地的豆豉中筛选出产纤溶酶活为１２３０～１２５６ＩＵ／ｍＬ的菌株，经鉴定初步推断属芽

孢杆菌属。湖北工学院向梅等［４］从豆豉中筛选到一株枯草芽孢杆菌ＨＧＤ１０７，吴思方等［５］对该菌种进行发酵条件优化，其纤溶酶活可达到３６４３

ＩＵ／ｍＬ。本文作者所在实验室，从广泛收集的豆

豉成品及半成品中分离到一株产纤溶酶的枯草芽孢杆菌，经发酵条件优化后其纤溶酶活性可达到

３．豆豉纤溶酶的分子生物学研究

彭勇等［１２］在以上研究的基础上，首先对豆豉

纤溶酶进行分子生物学方面的研究。他们将ＢＡ－

２３００ＩＵ／ｍＬ。四川大学彭勇等［６］从豆豉首次筛选出一株解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａ－ｃｉｅｎｓ）ＤＣ－４，经过发酵条件的优化该菌产生的纤溶活性可达到８２０ＩＵ／ｍＬ。张勇等［７］对已经过紫

外线诱变和亚硝基胍复合诱变的产纤溶酶菌株采用离子注入诱变，最高产量可提高５１．１３％，并且诱变菌 …… 此处隐藏：3595字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……