响鲎试剂灵敏度测定结果因素的分析

本文对影响鲎试剂灵敏度的一些因素进行了阐述,个人认为很有帮助。

中国药师!

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影响鲎试剂灵敏度测定结果因素的分析

张红霞!陈慧!马金刚!（兰州军区联勤部药品仪器检验所!兰州"#$$%$）

关键词!鲎试剂；鲎试验；细菌内毒素；凝胶法

中图分类号：&’(")*(!!文献标识码：+!!文章编号：*$$,-$.’/（($$"）$,-$,(%-$(!!鲎试剂法是热原检查的重要经典方法，与传统的家兔法相比，具有灵敏度高、重现性好、成本低、操作简便、易于掌握为防止因选择、购买不当而引起的检验误差，一方面，购入时要选择质量较稳定的鲎试剂，要求必须具有国家颁发的等特点，更便于基层检验推广使用。如何用鲎法替代家兔法

检查热原也因此成为人们比较关心的问题［*，(］。细菌内毒

素检查法系利用鲎试剂与细菌内毒素在一定条件下的反应结果来判断供试品是否符合规定的一种体外检测方法。鲎试验结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度标示值相关性很大。所以，一定要严格执行鲎试剂的质量标准，尤其是鲎试

剂灵敏度的复核尤为重要［#］

。鲎试剂灵敏度复核实验试验

器具、细菌内毒素标准品、检查用水、实验环境、温度、鲎试剂自身特性等因素的影响与制约，如果选择或操作不当，势必会影响实验结果，甚至导致实验失败。本文对导致鲎试剂灵敏度测试结果误差的几个常见因素予以分析，为鲎试验提供参考。

!"鲎试剂自身质量不合格

鲎试剂质量体现在灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面。*)*!灵敏度

鲎试剂的标示灵敏度即在药典检查法规定的条件下，使

鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度［.］

。随存放时间、试验

条件的不同，试剂在使用过程中的灵敏度也不尽相同。存放一定时间后（如半年），质量稍差的试剂其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒素的允许限值发生变化。灵敏度偏低易产生“假阴性”，灵敏度偏高易产生“假阳性”。*)(!自凝时间

自凝时间指用无热原水或厂家所提供的内毒素检查用水将鲎试剂溶解，（#"0*）1放置后产生凝集所需的时间。(.2不凝集的为质量优者，自凝时间不低于.2者为合

格［%］。因为质量较优的鲎试剂本身不含内毒素或即使含有

内毒素，其量也较少，不足以促发鲎试验生化反应。质量较差的鲎试剂自凝时间短，是因为试剂本身混有相当量的内毒素，这种鲎试剂是不能使用的。*)#!成胶状态

成胶状态即鲎试验反应终点时产生的凝胶状态。质量优者反应前具良好的流动性，反应后即形成坚实凝胶，将成胶安瓿翻转*,$度而不会被破坏。质量劣者，反应终点时生成的凝胶不牢固，易滑脱、破坏，有的甚至于反应终点时不能成胶。

批准文号；一批新试剂应复核其灵敏度；对留样鲎试剂自生产之日起，每3个月进行一次灵敏度检测，其灵敏度*,个月

内应符合规定［3］

；鲎试剂不应产生自身凝集作用，应具有一

定的缓冲能力与合适的45。我国现用的鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，本品含能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原、凝固蛋白原，其灵敏度以细菌内毒素国家标准品或工作标准品测定，应为标示量的%$67($$6［.］；另一方面，要适量购买，防止积压；贮藏要避光，严格控制温、湿度，避免防止因选购、贮藏不当、质量下降而引起的检验误差。

#"细菌内毒素标准品本身效价不准确

鲎试剂灵敏度检测中细菌内毒素标准品的效价亦是影响实验结果的重要因素。因此，选择合格的细菌内毒素标准品是必不可少的。细菌内毒素的化学成分是脂多糖的复合体，即脂多糖（89:）是由;-特异性链-核心多糖-类脂+三部分组成，其中类脂+的酰氨键是构成不稳定的重要因素之一。故细菌内毒素标准品在运输或保管时易受气温影响而使效价衰减。为避免试验结果的错判，标准品的获得除应必须是由中国药品生物制品检定所统一发放外，对标准品的效价复核亦为重要。

细菌内毒素标准品效价的测定方法如下：取.支样品（待标）及一支国家标准品，使用同一批号鲎试剂，每支样品按重量，标准品按单位，分别用内毒素检查用水稀释制备一系列(倍稀释度的内毒素溶液，与鲎试剂反应。当.支样品的反应终点的对数平均值的标准差小于$)#3%时，计算.支样品反应终点的几何平均值（-<=>?@A，以A> B<C*表示）及标准品的反应终点值（以DE B<C*表示），按下式计算样品的效价：

*样品效价F

标准品终点值（DE B<C）

B<）

FDE B<C*样品终点值（A>C*

$"细菌内毒素检查用水的质量标准低

细菌内毒素检查用水主要进行所用鲎试剂的溶解以及细菌内毒素标准品稀释，是实验过程中极为重要的一个环节。细菌内毒素检查用水的质量标准低会直接影响鲎试剂的检测结果。细菌内毒素检查用水是一种特殊的水，它不仅要求有严格的45（3),7,)(），而且其内毒素含量必须小于$)$*%DE B<C*，与鲎试剂在（#"0*）1条件下(.2不产生

凝集反应［.］

。它不同于注射用水，不能用于代替使用。如有

#"!

本文对影响鲎试剂灵敏度的一些因素进行了阐述,个人认为很有帮助。

>>>1?<@A1BC<0000000000000000000000000000000000些生产单位或医疗单位生产注射用水，经过严格检查达不到现行版药典要求，这类注射用水是不可以使用的。因此，我们现用的细菌内毒素检查用水主要由鲎试剂生产厂家提供，质量较稳定。!"实验器具不洁净

玻璃试验管、稀释管、刻度管、铝盖盒等实验用具洗涤不彻底，也会影响下次的检验结果，使实验失败或造成误差。因此，每次检验完毕，玻璃器皿应及时用铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗!遍以上，控干后放入适宜的密闭容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱，"#$%以上干热灭菌处理（待烤箱温度

［&］升至设定的温度后开始记时），也可用其他适宜的方法，

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试液的管壁处，样品加入后立即轻轻摇匀。%活化物质的影响：有的厂家生产的鲎试剂中未加活化物质，而加在溶解液中，故最好以配套的溶解液来溶解鲎试剂。&*+的影响：生成凝胶的最适*+为,-.，对于氯化钠注射液、葡萄糖注射液（#’，/$’）等液体，由于鲎试剂本身的缓冲作用，可以不考虑供试液的*+，而检查其他制剂时，应考虑供试品的*+，尤其是一些本身缓冲能力较强或偏酸、碱的供试品。$"操作温度与操作时间的影响

实验室温度和恒温水浴箱的温度，都是不容忽视的因素。!)%并不是最高反应温度，反应温度越高，反应速度越大。即使在室温下操作，内毒素和样品混合液不待进入!)%恒温反应器内反应已告开始，这样操作误差较大。操作温度较低，试管外壁易结露，同样会引起测定误差。因此，在鲎试验中要重视温度的变化，同时应注意保温时间，尤其夏天室温较高时，加样在冰水浴中进行可取得较好效果。

另外，进行鲎试剂灵敏度复核实验时，实验室要求洁净、无尘埃流通；操作者应以严谨的科学态度严格执行操作规程，以确保检测结果真实可信。

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/0潘东扬，汤秋华1灯盏细辛注射液细菌内毒素检查法的探讨［2］1中国药< …… 此处隐藏：5704字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……