微生物限度检查若干问题剖析(4)

菌种保藏是微生物学基础工作中的一项重要内容，用人工方法低温干燥，缺氧等抑制微生物的代谢，以达到保种。保持菌种原有的各种生物学特性，不变异，不污染的目的。

国内药品微生物检验所用的菌种是CMCCB''即医学微生物菌种保藏管理中心BBacteria代表细菌''FFungi代表真菌。

方法：①琼脂斜面：将营养琼脂培养基内按05加入琼脂粉配制，用于细菌接种传代，硅胶橡皮塞塞紧，放4℃冰箱保存，2-3个月传一次。 ②半固体琼脂：营养肉汤培养基内按05加入琼脂粉配制''穿刺接种''置冰箱保存''6-12个月传一次。 ③真菌琼脂斜面 蛋白胨5g 酵血浸出粉2g 葡萄糖20g 磷酸氢二钾1g 硫酸镁05g 琼脂粉10g 水1000ml

如白色念珠菌10231，划线接种后，置20～25℃培养24h。3-6个月传一次。 ④沙氏琼脂斜面:用于真菌传代 蛋白胨10g 葡萄糖10g 琼脂粉10g

水1000ml

⑤40甘油水 接种细菌培养后，放冰箱保存，12月传1次。

⑥需气菌、厌气菌培养基：生孢梭菌CMCCB64941菌液取01ml至需气菌、厌气菌培养基15ml''在30-35℃培养18-24h。

菌种应由专人保管''菌种的购入、传代、使用销毁等均应有记录。定期检查、分离、纯化以防菌种变异及衰退。 七、细菌计数方法：

①10倍递增稀释：用接种环取斜面菌苔少许，接种至营养肉汤2ml''培养后为菌原液''取10支试管，每管装稀释剂9ml''取菌原液1ml至第一管与9ml稀释剂混匀为1:10''依次稀释。如取10-601ml在营养琼脂平皿上划线培养计数。

②二管法：取二支试管，管内装稀释剂5ml''用接种环直径3mm，取一环菌原液至第一管''摇匀，烧接种环，从第一管再取一环至第二管，混匀，从第二管取01ml为50-100个菌。（可同时取01ml在营养琼脂平皿上划线培养计数）。

③64941计数方法。

取10支试管，每管装需气菌、厌气菌培养基9ml，取第一天24h培养的菌原液1ml至第一管与9ml需厌气培养基混匀为1:10，依次稀释。 结果观察：

────────────────────────────── 稀释倍数10-110-210-310-410-510-610-710-810-910-10 ──────────────────────────────

菌落计数浑浊浑浊浑浊浑浊浑浊不可计92清亮清亮 ──────────────────────────────

注：10-1至10-5管浑浊，10-6管可见灯笼状菌落悬挂，但无法计数，10-7管中可见9个菌落悬挂，10-9～10-10管无菌落生长。

推算：10-7管有9个菌/9ml''为1个/ml''10-4管为1000个/ml，取10-4管01ml有100个菌。

MUG-Indole大肠埃希氏杆菌检查法 一、原理

大肠埃希氏杆菌具有β葡萄糖醛酸苷酶，在弱碱性条件下，可使培养基中底物分解，其分解产物在365nm紫外光下呈现荧光。 分解

大肠埃希氏杆菌（β葡萄糖醛酸苷酶）4-甲基伞形酮葡糖苷酸 PH74

（MUG）培养基葡萄糖醛酸苷4甲基伞形酮（365nm紫外光下呈现荧光。） 二方法与步骤

供试品供试液BL（待检样品）37℃ （1：10）BL（阳性对照）各取02ml接种 稀释剂BL（阴性对照）18-24h至MUG培养基

37℃无荧光:MUG－滴加靛基质试液（I） 365nm有荧光:MUG＋液面为试剂本色I- 5-24h紫外光下液面为试剂本色I 三结果判断

MUG-I检查法结果判断 MUGIEMBIMViCG染色报告 阴性对照管－－ 阳性对照管＋＋ ＋＋检出大肠埃希氏杆菌 －－未检出大肠埃希氏杆菌 ＋－无菌落生长

（－）（＋）未检出大肠埃希氏杆菌 －＋－＋－－G_菌

（＋）（－）有菌落生长＋＋－－G_菌检出大肠埃希氏杆菌