微生物限度检查若干问题剖析(2)

液体蒸发损失。 2固体制剂：

片剂：称样10g至研钵量取稀释剂100ml，先加10ml浸没样品，研磨，将上层液倒入锥形瓶，再加少许稀释剂研磨，同上操作直至样品全部研细制成1:10的供试液。

丸剂及锭剂：中药蜜丸取4丸以上剪碎后称样10g''放置匀浆仪专用的不锈钢匀浆杯内，加入稀释剂100ml，3000转/分''2min制成1:10的供试液。 胶囊：硬、软胶囊，称样10g，加入稀释剂100ml''放45℃水浴10分钟后振摇''使溶解。

肠溶片（胶囊）、稀释剂用无菌磷酸盐缓冲液pH68100ml。 茶剂：称样10g加稀释剂100ml浸泡30min，用无菌纱布过滤取滤液（1:10的供试液。

袋泡茶取2袋称量''加稀释剂配成1:10浸泡30min。

胶剂：如阿胶，先放4℃冰箱1h''取出后立即称样10g，放入匀浆仪内捣碎或用无菌的不锈钢捣罐捣碎，放45℃水浴促溶。

气雾剂：不含抛射剂的可拧开取样10ml，加稀释剂90ml1:10含抛射剂，需先放4℃冰箱1h减压，然后用无菌钢锥钻孔（勿拨出钢锥），转动钢锥使抛射剂徐徐抛出，再用无菌注射器抽出全部药液，然后按标示量用稀释剂补足为原液，以下操作同液体制剂。

乳膏剂：称样10g，加聚山梨酯-805ml促溶''加稀释剂至100ml。 非水溶性供试品： 司盘单硬脂酸甘油酯法：眼膏、软膏剂，以凡士林为基质，不溶于水需加乳化剂使供试品乳化。用减量法称样5g，加入含

已灭菌溶化并保温45℃左右的司盘-805g、单硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯-8010g混合物的烧杯中，在45℃水浴中振摇使供试品中凡士林基质乳化''慢慢加入45℃左右的09无菌氯化钠溶液85ml''边加边振摇制成1:20供试液。

（二）抑菌性供试品供试液的制备

抑菌及抗菌性药品，如抗生素、沙星类，既然有抑菌杀菌作用，为什么还要做微生物限度检查，其原因是：

①被污染的微生物在抗菌药品中因生存环境不利，呈休眠受损状态，但未死亡，一旦用于人体，当条件改变或适宜时，便复苏仍可生长繁殖，对人体造成危害。有的耐药性致病菌株可成为对该抗菌药的依赖株。 ②抗细菌的药品，不能抗真菌，所以可能被真菌污染；抗真菌的药品不能抗细菌，所以可能被细菌污染，故2000年版药典要求口服抗生素抗细菌的药品检查真菌，抗真菌的药品检查细菌。

细菌数及真菌数的测定，供试品未经特殊处理，因三级稀释，基本上可起到稀释后消除抑菌成分的作用。

1稀释法：取1:10的供试液10ml加入增菌液在200ml以上

2沉降法：制成1:10的供试液摇匀后静置10min，使药品中污染的微生物混悬于供试液中，难溶于水的抑菌成分自然沉降在容器底层，吸取上层液10ml至增菌液。

1、2法适合于抑菌性弱的药品。

3薄膜过滤法：由于细菌的直径约1μm''利用045μm微孔滤膜阻截细菌，滤除抑菌成分，冲洗膜上残留抑菌成分，达到消除抑菌成分之目的。如氯

霉素滴眼液，取1:10的供试液40ml，通过直径为50mm装有045μm孔径微孔滤膜的无菌滤器，过滤后用09无菌氯化钠溶液冲洗，冲洗量约1000ml，无菌手续取出滤膜放至无菌平皿内，剪成四等份，各取一片分别放置营养内汤增菌液二瓶（其中一瓶加入金黄色葡萄球菌50-100个及胆盐乳糖增菌液二瓶其中一瓶加入铜绿假单胞菌50-100个。同时做阴性对照（加稀释剂10ml）。

凡士林基质的眼膏、软膏 减量法称样10g，加十四烷酸异丙酯20ml''摇匀''使凡士林基质溶解后徐徐加入09无菌氯化钠溶液80ml1:10边加边摇''静置''待分层''取水层20ml加稀释剂至100ml，过滤，冲洗（量1500ml''剪膜操作同上。

4离心沉淀法：利用供试品药物颗粒及细菌不同物质质量的差异，在离心力的作用下达到分离的目的。

一次离心法：取1:10的供试液20ml分别放至二支尖底离心管内各10ml，其中一支管内加入阳性对照菌50-100个''3000转/分''5分钟，弃去上层可溶性抑菌成分。

二次离心法：操作同上，第一次离心500转/分，3分钟''弃去沉淀药渣及不溶性抑菌成分;第二次离心3000转/分''5分钟''弃去上层可溶性属抑菌成分''取沉淀物约05ml加至增菌液中。

5中和法：如磺胺类药品，1:10的供试液摇匀后，先用沉降法，弃去沉淀（因磺胺药几乎不溶于水，沉于管底，污染菌在稀释剂中），取上层液10ml加入含1对氨基苯甲酸05ml的增菌培养基中，即可中和磺胺类药的抑菌作用。

对于复方磺胺制剂，需上法与薄膜过滤法联合应用方能奏效。 五、结果判断：特殊情况的处理方法

1延长培养时间，菌落极小，不易辨认，可延长培养至4-7天。乙醇提取的制剂，可延长培养时间再计数。

2排除药物颗粒：药物颗粒及培养基沉淀物、气泡、乳化剂等会影响结果判断，处理方法：

①多倾注平皿，放冰箱（勿冷冻），对照看结果。

②配制无菌1TTC氯化三苯四氮唑溶液，营养琼脂400ml加1TTC04ml混匀''浇平皿''细菌颜色呈红色''易辨认。 3不能作为计数依据：

①二个平皿菌落15个''二个平皿菌数相差1倍以上 ②二个平皿菌落≤15个''二个平皿之间菌落不在0-4''1-7''2-9''3-10''4-12''5-14''6-15。 ③片状菌落无法计算。 4防止片状菌落形成: ①营养琼脂中加入1TTC见上 ②换新近干烤灭菌陶瓦盖''倒置培养

③待琼脂凝固后''平皿倒置斜放净化台上''吹1h 5特殊情况报数:

───────────────────────────── 营养琼脂平皿玫瑰红钠琼脂平皿计数 …… 此处隐藏：643字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……