半夏多糖的含量测定

本实验旨在建立测定半夏多糖含量的方法。在该实验条件下,葡萄糖对照品在0.0033～0.015mg/ml的范围内线性关系良好,R=0.9990,重复性良好,精密度较高,加样回收率：98.96%,RSD<3%;本实验操作简便,可作为半夏多糖含量测定的一般方法。

http://doc.guandang.net

半夏多糖的含量测定

　　　师健友1 万丽1 卢先明1 王敏1 叶娉1 王凌1 刘富海2

1成都中医药大学药学院，四川成都，（610075）

2云南星森生物科技开发有限公司，云南昆明，（650224）

E－mail：shijianyoude@http://doc.guandang.net

摘 要 本实验旨在建立测定半夏多糖含量的方法。在该实验条件下，葡萄糖对照品在

0.0033～0.015mg/ml的范围内线性关系良好,R=0.9990，重复性良好，精密度较高，加样回收率：98.96%,RSD<3%；本实验操作简便，可作为半夏多糖含量测定的一般方法。 关键词 半夏；多糖；含量测定

中图分类号：R917 文献标识码：A

《中国药典》2005年版收载的半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternate (Thunb.)Breit.的干燥块茎，别名三步跳、麻芋子、水玉等。据报道半夏中多糖成分具有一定的抗呕吐作用。半夏其质量控制方法尚不完善，半夏所含多糖有镇咳、祛痰、止呕的药理作用，而半夏的主要功效就是祛痰、镇咳和止呕，多糖含量的多少在一定程度上反映了半夏的质量好坏，为能更好的保证药材质量，故对半夏的多糖含量测定方法进行研究，建立测定半夏多糖含量的方法。 [3][1][2]

1．样品、仪器与试剂

1.1样品 分别购自四川南充，并由校博物馆馆长卢先明教授鉴定为半夏 Pinellia ternata (Thunb.) Breit。

1.2仪器 BS200S电子天平、BP61电子天平、BP211D电子天平（北京塞多利斯天平有限公司）、KQ-50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、74B-4000型电动离心沉淀器（江苏龙冈医疗器械厂）、电热恒温水浴锅（北京国华医疗器械厂）、紫外-可见分光光度计（Perkin-Elmer）

1.3试剂 所用试剂均为分析纯；葡萄糖对照品批号：145322-200508购自中国药品生物制品检验所。

2.方法

本实验旨在建立测定半夏多糖含量的方法。在该实验条件下,葡萄糖对照品在0.0033～0.015mg/ml的范围内线性关系良好,R=0.9990,重复性良好,精密度较高,加样回收率：98.96%,RSD<3%;本实验操作简便,可作为半夏多糖含量测定的一般方法。

2.1 对照品溶液的制备

精密称取在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品18.75mg，置250ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含无水葡萄糖0.075mg）。

2.2测定条件的选择

对显色有影响的因素有：水浴温度、水浴时间、苯酚浓度。根据文献资料确定各自水平，对各影响因素作了考察。

2.2.1水浴温度的考察

吸取对照品溶液1.2ml于三角瓶中，加蒸馏水至2ml，立即加入5%苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入浓硫酸7ml，摇匀，于不同温度水浴中保温20分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在488nm波长处测定吸光度，结果表明 40℃测得的吸光度较高，故选择40℃为水浴温度。

2.2.2水浴时间的考察

吸取对照品溶液1.2ml于三角瓶中，加蒸馏水至2ml，立即加入5%苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入浓硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温不同时间，取出，置冰水浴中5分钟，取出，

结果表明，水浴20分钟的吸收度A较高，以相应试剂为空白，在488nm波长处测定吸光度，

故选择水浴时间为20分钟。

2.2.3苯酚浓度的考察

吸取对照品溶液1.2ml于三角瓶中，加蒸馏水至2ml，分别精密加入3%、4%、5%、6%苯酚1ml，混匀，迅速加入浓硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温20分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在488nm波长处测定吸光度，结果表明，5%和6％的苯酚溶液测得的吸光度较好，但6％的苯酚溶解不均匀，取样量不准确，故选择苯酚浓度为5％。

2.2.4取时间的考察

取半夏粗粉六份各1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100ml，称重，加热回流1，1.5，2小时，冷却，称重，加水补足重量，用脱脂棉滤过，取续滤液50ml。精密量取续滤液2ml，加乙醇10ml，摇匀，静置12小时，离心，取沉淀加水溶解，置50ml量瓶中，并加蒸馏水至刻度，精密量取2ml于三角瓶中，立即加入5%苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入浓硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温20分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在488nm波长处测定吸光度，结果表明，回流1.5小时和2小时比回流1小时的多糖含量高，而回流1.5小时和2小时的多糖含量相差不大，从经济合理的角度考虑，选取回流时间为

1.5小时。

2.3供试品的制备

称取同一产地半夏粗粉六份各约1.0g, 精密称定，加蒸馏水100ml，称重，加热回流

1.5小时，冷却，称重，加水补足重量，离心，取上清液2ml，加乙醇10ml，振摇，静置12

本实验旨在建立测定半夏多糖含量的方法。在该实验条件下,葡萄糖对照品在0.0033～0.015mg/ml的范围内线性关系良好,R=0.9990,重复性良好,精密度较高,加样回收率：98.96%,RSD<3%;本实验操作简便,可作为半夏多糖含量测定的一般方法。

小时，离心，取沉淀加水溶解，移入50ml容量瓶中加水定容至刻度。

2.4测定波长的选择

按供试品的制备方法，制备样品液和对照品液，并将样品和对照品液在400nm-600nm处进行光谱扫描，结果样品液和对照品液在488nm处都有最大吸收（见图1），故本含量测定选择488nm

作为测定波长。

图1样品液和对照品液的吸收曲线

2.5标准曲线的绘制

依次取葡萄糖对照品溶液0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml，分别加蒸馏水至2ml，立即加入5%苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入浓硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温20 分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在488nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，结果表明，葡萄糖溶液在0.003－0.015mg/ml呈良好的线性关系。

2.6方法学的考察

2.6.1精密度的考察

取对照品溶液1.2ml于三角瓶中加蒸馏水至2ml，加入1ml苯酚迅速摇匀，立即加入7ml浓硫酸，摇匀，置40℃水浴锅中恒温加热20分钟，置冰水浴中5分钟，平行6份以蒸馏水2ml加相应的试剂作空白，分别测定吸收度，结果RSD<3%，表明仪器的精密度良好。

2.6.2稳定性的考察

精密吸取供试品溶液2ml，置100ml三角瓶中，立即加入5%苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入浓硫酸7ml，摇匀，于40℃水浴中保温20分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出，以相应试剂为空白，在0、30、60、120、180、240分钟时测定吸光度,结果表明 ，待测样品液在4h 内稳定, 其RSD<3%。

2.6.3重复性的考察

称取同一产地半夏粗粉六份各约1.0g, 精密称定，按2.3项供试品的制备进行制备，测定，结果RSD<3%，重复性良好。

本实验旨在建立测定半夏多糖含量的方法。在该实验条件下,葡萄糖对照品在0.0033～0.015mg/ml的范围内线性关系良好,R=0.9990,重复性良好,精密度较高,加样回收率：98.96%,RSD<3%;本实验操作简便,可作为半夏多糖含量测定的一般方法。

http://doc.guandang.net

2.6.4回收率的考察

分别称取四川南充产半夏药材粗粉9份各约0.5g,精密称定，加蒸馏水100ml，称重，加热回流1.5小时，冷却，称重，加水补足重量 …… 此处隐藏：3530字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……