猪胸膜肺炎放线杆菌16SrDNA基因的克隆及序列分析

为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16SrDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)的16SrDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16SrDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMD18一T载体上,重组质粒通过菌落PCR鉴定后,对阳性菌落进行序列测定并进行序列分析。结果表明：本研究得到的长沙(cs)株与血清3、5、7型同源性为99.4%

湖南农业科学

2 1,1 )14 16 1 1 0 1 ( 5:5~ 5,6

Hu a cl rl cec s nnA ut a S ine u

猪胸膜肺炎放线杆菌 1 S r N D A基因的克隆及序列分析 6沈萍王喜军，(. 1湖南生物机电职业技术学院动科系，湖南长沙 4 02; 1 172长沙市动物防疫监督站，南长沙 4 0 1 ) .湖 10 2摘要：为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌 1SrN 6 D A基因的遗传变异情况，选择猪胸膜肺炎放线杆菌 (c nbc l A toaiu i lsper n u o i, P ) 1Sr N l o e m n eA P的 6 A基因设计引物， up a D应用聚合酶链反应 (C ) P R扩增 A P的 1 S D A基因的部分序列， P 6 N r将该产物克隆到 p D 8 T载体上， M 1一重组质粒通过菌落 P R鉴定后，阳性菌落进行序列测定并进行序列分析。 C对结果表明：本研究得到的长沙 ( s株与血清 3 5 7同源性为 9 . 9 .与李氏放线杆菌、 c)、、型 9%~ 9%, 4 6脲放线杆菌、马驹放线杆菌、荚膜放线杆菌同源性分别为 9. 9 . 9. 9 . 7%、 3 7%、6%。该结果为 A P分子流行病学调查、性关系的研究提供了依据， 8 6%、 3 3 P亲缘同时为 A P的监控奠定了基础。 P

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌；1SrN 6 A基因； D克隆及序列分析

中图分类号：15 S8

文献标识码： A

文章编号：06 00 (0 11— 14 0 10—6X 2 1)505— 3

Cln n n e u n eAn lsso 6 DNA n f o i g a d S q e c ay i f1 S r Ge eo Aci o a i u lu o n u n a t b cl s e rp e mo ie n l p S E ig, A G iin H N Pn’W N X—u( D p r e tf i a S i c, u a il i l 1 e at n o anm l c n e H nnBo g a&Eet m ca i l oy c nc C a gh 1 1 7 P C . m e oc l r ehnc lt h i, h nsa4 0 2, R; co aP e2 C a gh m l pdmi Peet nadSp ri ttn C agh 1 0 2 P C . hn sa n a E ie c rvni n u ev e ai, h sa4 0 1, R ) Ai o s

S o nAb t a t hssu yame o cai h e ei a ain stain o S r s r c:T i td i d t lr yteg n t vr t i t f1 DNA o t o a iu e rp e mo ie f c i o u o 6 f ei b cl splu o n u na A n l

( P )T e1 Sr N eeo P a l t einp mestep ra qe cs f1Sr N e eo P ee A P. h 6 D A gn f Pw s ee e t d s r r,h a ile un e 6 A gn f Pw r A s cdo g i t s o D A

a l e yuigpl rs h i rat n (C )adteot ndpo ut w r lndit p 1一 etrAt mpi db s o meaec a ci i f n y n e o P R, n ba e rd cs e coe o MD 8 Tvc . f r h i e n o et e r c mb n n l s d r d n i e y c l n CR, h o i v oo i sw r e u n e n n l z d T e r s l h e o i a t a mi swe e i e t d b oo y P p i f t e p st e c ln e e e s q e c d a d a ay e . i h e ut s

so e htte hm lg e en o t nd C a gh t i (S n e m 3 5 7 t ew s9 .%- 9%; h hw dta h o ooyb t e ba e h n sa s a w i r n C )ad sr ,, y a 94 9 . u p 6 teh mo o y b t e n t o a i u in ee i Ac io a i u r a Aci o a i u q u i Ac io a i u a s l u o lg ewe n CS a dAc i b cl s l i r si n l g, t b cl su e, t b c l s e u l n l n l, t b cl s c p u a s n l t

wa 7 8, 6 3, 7 3,9 _%, e p ci ey T e e r s l r v d a i fr su i s o l c l re ie o o y a d s 9 .% 9 _% 9 -% 63 r s e t l . h s e ut p o i e b ss o t d e n mo e u a p d mil g n v s p y o e ei ea in h p o h l g n t

r lt s i f c o APP a ela ad t ef u d t n f rmo i r g AP ., s w l sl i h o n a i o n t i P o on

Ke r s A t oaiu pe r n u o i A P; 6 N e e c nn n eun eaayi y wo d: ci bcl s l o e m na P ) 1Sr A gn; l ig dsq ec nls n l u p e( D o a s

猪胸膜肺炎放线杆菌 ( P ) A P为革兰氏阴性杆菌，可引起猪传染性胸膜肺炎 (o i ot iu p r n cn g s ce aoperp em na,C )该病由 Ptsn首次报道， l onu o i P P, u e ai to

漫长的生物进化过程中，因其受到的选择压力小， 基因序列变化缓慢，以用来标记生物的亲缘关系可和进化距离；在结构与功能上具有极为高度的保守

现已在美国、墨西哥、士、瑞丹麦、澳大利亚、加拿大、泰国、国、韩日本等国家广泛流行【1; -该病在我 2国也早已广泛存在，有扩大蔓延之势。A P血清并 P型较多，我国猪场中存在的就有 357 8 1型，、、、、0其中以 3型和 7型为最多 _发病时，猪出现心衰和 3 I。病

性，素有“细菌化石”之称阁。鉴于 A P P有很多血清型，且各血清型之间缺乏相互的交叉保护性，大很程度就是因为其不同血清型的外膜蛋白基因、能功

基因存在一定差异，因此，选择 A P的 1S D A P 6 N r基因设计引物，对在湖南分离到的长沙 ( s株的 c)1Sr N 6 D A基因进行了克隆和测序；并与已报道的

循环障碍，精神委顿，食欲废绝；晚期出现严重的体

温下降和呼吸困难；临死前从嘴、 L出血性泡鼻孑流

血清 3 57型做序列比对，进行同源性分析。为、、AP P分子流行病学调查、亲缘性关系的研究提供资料，同时为 A P的监控奠定基础。 P

沫样液体。病猪于发病后 2— 6h内死亡， 4 3死亡率高达 8%- 0% 0 10。

1Sr N 6 A为原核生物的一种核糖体 R A, R N在收稿日期：0 10—8 2 1-4 2作者简介：萍(92 )女，沈 17一，湖南长沙市人，实验师，硕士，主要从事实验室诊断、兽医卫检、动物产品加工及动物微生物教学。

l试验部分11材 .料

1 .病料来源存于湖南生物机电职业技术学 .1 1