000001bd_徐露-应用药理2

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EGB制剂、阿司匹林及波立维抗血小板聚集作用比较及对PAF

含量影响

徐露 董志 王如伟 黄黎

（重庆医科大学 药学院 重庆市生化与分子药理重点实验室 400016 ）

【摘要】目的 观察EGB（银杏叶提取物）制剂、阿司匹林及波立维对家兔血小板聚集率及PAF含量的影响。方法 采用体内实验，观察EGB制剂、阿司匹林及波立维对由花生四烯酸（AA）、二磷酸腺苷（ADP）和血小板活化因子（PAF）诱导的家兔血小板聚集作用的影响，以及对给药前后家兔血小板活化因子（PAF）含量的影响。结果 与生理盐水组相比，EGB制剂抑制AA、ADP、PAF诱导的家兔血小板聚集有显著差异（p<0.05，p<0.01），并能够降低血清中PAF的含量（p<0.05）；阿司匹林对AA诱导的血小板聚集有显著差异（p<0.01）；波立维对ADP诱导的血小板聚集有显著差异（p<0.01）；而阿司匹林和波立维对PAF的含量没有显著影响（p>0.05）。结论 EGB制剂具有抗血小板聚集作用，抗PAF诱导的血小板聚集作用最强，并能显著降低PAF含量，是一种新的作用途径的药物，为临床抗血小板聚集的用药提供了新的选择。

EGB（银杏叶提取物）制剂是由银杏叶提取得到的，它的活性成分主要是黄酮和银杏内酯，具有抗炎和保护神经作用。阿司匹林和波立维是临床常用的抗凝药物。本实验将比较这三种药物抗血小板聚集的途径及靶点特异性。 1. 材料与方法 1.1仪器与试剂

日本大耳白兔，体重2.0±0.2kg，雌雄各半，由重庆医科大学实验动物中心提供；EGB制剂（天保宁片，浙江康恩贝制药股份有限公司生产）、阿司匹林（拜耳药业）、波立维（赛诺菲-安万特）；AA（sigma）使用时将其溶解在1%碳酸钠溶液中，配成0. 35mmol/L的浓度；ADP（sigma）溶于磷酸盐缓冲液,最终浓度为300µmol/L；PAF（cayman）溶解在PH为7.6的含0.25%小牛血清蛋白的Tris-NaCl溶液中，终浓度为3.6nmol/L；枸橼酸钠（北京中杉金桥生物技术公司）蒸馏水配成3.8%的浓度；TYXN-96多功能智能血液凝聚仪（上海通用技术研究所研制）；兔血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒（Uscnlife）；酶标仪（spectra maxm2多功能酶标仪）。 1.2方法

1.2.1分组及给药方法

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日本大耳白兔28只，随机分为4组，每组7只：生理盐水组、EGB制剂组、阿司匹林组、波立维组。以上各组剂量均根据文献[1]由人体剂量换算为家兔等效剂量，ig给药，生理盐水组、EGB制剂组每日三次，阿司匹林和波立维组每日给药一次，连续7d。 1.2.2检测血小板聚集率及PAF含量

每只动物首次给药前，耳缘静脉抽血1ml，室温放置2h取血清，检测给药前PAF含量。在第7d给药后1h，心脏取血7ml，分出1ml用于检测给药后PAF的含量，剩余6ml用3.8%枸橼酸钠1：9抗凝，800r/min离心10min，取上清得富血小板血浆（PRP），剩余部分3000r/min速度离心15min，取贫血小板血浆（PPP）。用PPP调节PRP，使PRP血小板数目在360×109/L。测定并记录在不同诱导剂下1min、5min及最大血小板聚集率。

血小板聚集率（%）=（对照组血小板聚集率-给药组血小板聚集率）/对照组血小板聚集率×100

1.2.3统计方法

血小板聚集率检测用生理盐水组与给药组比较，采用成组t检验；PAF含量检测采用给药前后自身对照，用配对t检验。 2.2结果

2.2.1家兔血小板聚集率的检测结果

检测结果表明，和对照组相比， EGB制剂能抑制AA、ADP、PAF诱导的家兔血小板聚集(p<0.05, p<0.01)，并且对PAF诱导的血小板聚集抑制作用最强(38.93%)；和对照组相比，阿司匹林对AA诱导的血小板聚集有显著差异（p<0.01）；波立维对ADP诱导的血小板聚集有显著差异（p<0.01）。（见表1-3）

表一 AA诱导的血小板聚集作用（±s,n=7)

与生理盐水组相比，**p<0.01,*p<0.05

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表二 ADP诱导的血小板聚集作用（±s,n=7)

与生理盐水组相比，**p<0.01,*p<0.05

表三 PAF诱导的血小板聚集作用（±s,n=7)

与生理盐水组相比，**p<0.01,*p<0.05

2.2.2家兔PAF含量检测结果

检测结果表明，与给药前相比，EGB制剂能降低家兔血清中的PAF含量（p<0.05）；而阿司匹林和波立维给药前后PAF含量无显著差异（p>0.05）。（见表4）

表四 PAF含量检测结果（±s,n=7)

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给药前后比较，**p<0.01,*p<0.05 3. 讨论

血小板聚集有多种诱导机制，AA、ADP、PAF是通过三条不同的机制来诱导血小板聚集的，这三条途径也是血小板聚集的主要途径。虽然途径不一样，但最终都是通过降低血小板cAMP水平和增加Ca2+浓度而引起血小板活化的，随之血小板黏附，从而形成血栓。本实验用AA、ADP、PAF这三种诱导剂来诱导血小板聚集，代表了血小板三种不同的聚集途径。通过本实验发现，EGB制剂对AA、ADP、PAF诱导的血小板聚集均有抑制作用，并且对PAF诱导的血小板聚集的抑制作用最强。阿司匹林和波立维分别对AA和ADP诱导的血小板聚集有明显的作用。另外，EGB制剂还能降低家兔血清中PAF的含量，这对于预防与控制血栓的形成与发展具有重要的意义。

阿司匹林和氯吡格雷是临床上抗血小板聚集的常用药，分别阻断AA途径和ADP途径，但近年来临床上出现阿斯匹林和氯吡格雷抵抗现象，是非常棘手的问题，即使两种药物联用有时也会治疗失败。阿司匹林和氯吡格雷对PAF途径没有任何作用，因此多一条阻断PAF的途径无不加强了抗血小板聚集的效果。通过本实验发现EGB制剂有显著的拮抗PAF受体的作用，是不依赖于AA、ADP的第三条途径，并能显著降低实验兔血清中PAF的含量，是阻断PAF途径的有效药物，与阿司匹林和波立维联用可能会具有更好的抗血小板聚集效果。 参考文献

[1]黄继汉，黄小晖，陈志扬等.药理实验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算[J].中国临床药理学与治疗学，2004，9（9）：1069-1072

[2]Braquet P，Touqui L，ShenTY,etal.Perspectives in platelet activating factor research[J].Pharmacol Rev，1987，39（2）：97

[3] Simon MF;Chap H;Braquet P;Douste-Blazy L.Effect of BN 52021, a specific antagonist of platelet activating factor (PAF-acether), on calcium movements and phosphatidic acid production induced by PAF-acether in human platelets [J]. Thrombosis research，1987，45（4）：299-309

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[4]Guo N J，Chang YL，Xiao DJ，et al.Activation of Platelet-neutrophil mediated by platelet-activating factor[J].J Exp Hematol，2005，13：447-451

[5] Braquet P,Hosford D.Ethnopharmacology and the development of natural PAF antagonists as therapeutic agents [J]. J Ethnopharmacol，1991，32（1-3）：135-139