第一章 植物组织培养实验室的构建与操作技术

第二章 植物组织培养实验室 的构建与操作技术 主要内容组织培养实验仪器设备及使用方法 培养基的制备方法和步骤 外植体的灭菌方法 无菌操作技术 褐变和玻璃化原因及应对措施

第一节 植物组织培养实验室及主要设备 一、实验室设计与设备 实验室设计原则：保证无菌操作，达到工 实验室设计原则 作方便，防止污染。 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒排，引 组织培养流程来设计 避免某些环节倒排， 来设计， 起日后工作混乱 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结构设计， 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结构设计， 达到严格无菌的条件

组培的常见技术路线： 组培的常见技术路线： 外植体→愈伤组织→不定芽→生根→ 外植体→愈伤组织→不定芽→生根→再生植株

基本的工艺流程： 基本的工艺流程： 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→ 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→外 植体消毒与无菌操作接种→观察、记录、 植体消毒与无菌操作接种→观察、记录、处理 (脱分化、再分化、继代) →再生植株 脱分化、再分化、继代)

标准的组培实验室 标准的组培实验室 洗涤室、准备室、无菌室、培养室、 洗涤室、准备室、无菌室、培养室、观察室 等 基本组培实验室 基本组培实验室 准备室(含配药室)、缓冲间、 准备室(含配药室)、缓冲间、无菌操作室 )、缓冲间 、培养室

1、准备室(化学实验室) 、准备室(化学实验室) 功能：进行一切与实验有关的准备工作 功能： 器皿洗涤、药品的配制 器皿洗涤、 培养基配制与分装 培养基和培养器皿的灭菌 培养材料的预处理等

要求： 要求： 明亮、通风 明亮、 便于多人同时工作 地面应便于清洁，并应进行防滑处理 地面应便于清洁，

准备室主要仪器设备： 准备室主要仪器设备：(1)工作台 (1) 工作台 (2)药品柜 (2) 药品柜 (3)冰箱 (3) 冰箱 普通冰箱、低温冰箱等。主要用于贮存母液、 普通冰箱、低温冰箱等。主要用于贮存母液、 各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料 各种易变质、 等。 (4)天平 (4) 天平 感量0.001g的分析天平、感量 的分析天平、 感量 的分析天平 感量0.0001g的电子 的电子 天平( 天平(用于称量微量元素和一些较高精确度的 实验用品)、感量为0.1g的托盘天平(用于称取 )、感量为 实验用品)、感量为 的托盘天平( 用量较大的糖和琼脂等) 用量较大的糖和琼脂等) 放置在水平、干燥、 放置在水平、干燥、不受震动的操作台上

(5)恒温

水浴锅 (5)恒温水浴锅 (6)蒸馏水发生器 (6)蒸馏水发生器 蒸馏水用于配制母液或培养基( 蒸馏水用于配制母液或培养基(普通实 验可以用自来水代替蒸馏水) 验可以用自来水代替蒸馏水) (7)电炉 (7)电炉 (8)高压灭菌锅 (8)高压灭菌锅 进行培养基、 进行培养基、水和器械用具的灭菌

不锈钢蒸馏水器(单蒸水) 不锈钢蒸馏水器(单蒸水)

(9)酸度计 (9)酸度计 测定培养基及酶制剂的pH pH值 测定培养基及酶制剂的pH值(普通实验可使 pH试纸 试纸) 用pH试纸) (10)烘箱 (10)烘箱 干燥洗净的玻璃器皿， 干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌 和测定干物重 (11)摇床 (11)摇床 振荡培养 (12)离心机 (12)离心机 分离培养基中的细胞以及解离细胞壁后的原 生质体

PHS-802中文台式酸度计 中文台式酸度计 全 温 型 恒 温 培 养 摇 床 多 振 幅 高 速 轨 道 摇 床

通用型或经济型酸度计

2、缓冲室(注意门的朝向) 缓冲室(注意门的朝向) 工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口罩 工作人员在此换上工作服、拖鞋， 功能减少人体从外界带入的尘埃等污染物。 减少人体从外界带入的尘埃等污染物。

要求缓冲间需3-5平方米，应保持清洁无菌； 缓冲间需 平方米，应保持清洁无菌； 平方米 有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服； 有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服； 1-2盏紫外灯定时照射，对衣物及空间进行灭菌。 盏紫外灯定时照射，对衣物及空间进行灭菌。 盏紫外灯定时照射

3、无菌操作室(接种室) 无菌操作室(接种室) 功能 功能外植体消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、 外植体消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原 生质体的制备等

要求 要求环境干爽，清洁， 环境干爽，清洁，居于上风位 空间宜小不宜大 地面、天花板及四壁密闭光滑， 地面、天花板及四壁密闭光滑，无卫生死角 室内物品越少越好， 室内物品越少越好，尽可能减少空气流动

维护方法 维护方法定期消毒(紫外线照射、气雾熏蒸、药品喷洒) 定期消毒(紫外线照射、气雾熏蒸、药品喷洒) 及时维护(干燥、洁净) 及时维护(干燥、洁净)