鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用

　试验研究

ChinaFoodAdditives

中国食品添加剂

鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用

黄敏,孔明航,王丽明

1

2

1

(1.长江大学生命科学学院,荆州　434025;2.湖北省国营大垸农场,大垸　433300)

　　摘　要:研究从鸡蛋清中提取与精制溶菌酶的方法,观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用。从鸡蛋清提取溶菌酶的方法:取出鸡蛋清,过滤,用蒸馏水溶解,加氯化钠,pH至510,加入溶菌酶晶种,4℃下静置结晶,过滤,可以得到溶菌酶粗品。将粗品溶菌酶溶解,,重复3次,可以精制溶菌酶。结果表明,鸡蛋清溶菌酶提取的较优条件是:酶液pH1010、2。70℃下保温5min,鸡蛋清溶菌酶的精制率最高。,80℃加热30min关键词:溶菌酶;鸡蛋清中图分类号:15:A　　　文章编号:1006-2513(2010)03-0154-04

Theextractionandantibacterialeffectof

lysozymefromhen2eggwhite

HUANGMin,KONGMing2hang,WANGLi2ming

1

2

1

(1.CollegeofLifeScience,YangtzeUniversity,Jingzhou434025;

2.

StateFarmofDayuan,Hubei,Dayuan433300)

Theex2

Abstract:TheextractionandantibacterialeffectofLysozymefromHen-eggWhite(HEW)werestudied.

tractionprocessoflysozymefromHEWwereasbelow:HEWweregotandfiltrated,dissolvedwithdistilledwater,NaClwasadded,thepHofthesolutionwasadjustedto510,thenlysozymeseedwasadded,thecrystallinewasac2complishedat4℃,andcrudeLysozymewasgot.Thecrudelysozymewasrefinedbydissolutionandrecrystallization.TheantibacterialeffectoflysozymeonEscherichiacoliandStaphylococcusaureuswasestimatedbyfilterpapermethod.TheresultsshowedthatthebetterprocessingparameterforHEWextractionwerebelow:thepHofHEWsolutionwas1010,HEWwasdilutedby2timesvolumedistilledwaterand5%(w/vNaClHEW)wasadded.

Theyieldofrefi2

ningwashighestwhentempetaturekept5minat70℃.HEWhadevidentantibacterialeffectonEscherichiacoliandStaphylococcusaureus.Processingat80℃for30minhadnearlynoeffectonantibacterialeffectofHEW.Keywords:lysozyme;hen-eggwhite(HEW);extraction;antibacterialeffect

溶菌酶(Lysozyme,EC31211117)又称胞壁

质酶(Muramidase)、N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-AcetylmuramideGlycanohydrolase),能选择性

收稿日期:2009-05-14

地分解微生物的细胞壁而具有杀菌、抗病毒、抗

肿瘤细胞等功效,具有生物相容性好、对组织无刺激、无毒性等优点,在食品工业、医疗、生物

作者简介:黄敏(1975-),女,讲师,硕士,主要从事食品生物技术的教学与科研工作。

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试验研究ChinaFoodAdditives

学等领域有着广泛的应用

[1-3]

。

溶菌酶广泛存在于鸟、家禽的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿、乳汁和组织细胞中,以蛋清中含量最为丰富。目前,多数商品溶菌酶是从蛋清中提取的

[4-6]

操作3次,结晶经冷冻干燥后即得精制溶菌酶。11312　溶菌酶粗提取单因子试验主要考察氯化钠的用量、蛋清稀释倍数、酶液pH对溶菌酶粗提取率的影响。试验中蛋清液的用量固定为100mL,比较氯化钠添加量为4%、5%、6%、7%;蛋清稀释倍数为1、2、3、4;酶液pH为815、915、10、1015。11313　溶菌酶粗提取条件优化

3

在单因子试验的基础上,选用L9(3)正交

。本文优化从鸡蛋蛋

清提取与精制溶菌酶的工艺条件,并观察溶菌酶对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用。

1　材料与方法

111　试验材料

表,进行正交试验,数表。因素水平见表。

1L9(33)

(倍)(因素A)

234

pH(因素B)91510101015

鸡蛋:长江大学西校区市售的新鲜鸡蛋;

大大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus):长江大学生命科学学院微生物实验室提供;

溶菌酶标准品:,20000U/mg,;

氯化钠加入量

(%w/v)(因素C)

456

123

氯化钠剂;蛋白胨、琼脂粉等为国产生化试剂。

112　试验仪器

11314　溶菌酶提取率测定

冷冻干燥机(Alpha)、万分之一电子天平、pHS-2C精密pH计(上海雷磁仪器厂)、超净工作台、电热恒温培养箱、高压灭菌锅、平板打孔器。

用万分之一电子天平称取冷冻干燥后溶菌酶晶体质量,减去作为晶种加入的溶菌酶质量,除以蛋清液体积。

11315　溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑

制作用

[7-8]

113　试验方法

11311　溶菌酶的提取与精制方法

采用滤纸片法。用打孔器打出直径5mm滤纸圆片,高压灭菌。分别吸取011mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌菌悬液加在已倒好的牛肉膏蛋白胨平板培养基表面,涂布均匀。用无菌镊子夹取已在溶菌酶溶液中浸渍30min滤纸片,放到上述含菌平皿上,每皿三片,于37℃恒温培养24h后取出,量取抑菌圈直径,取其平均值作为实验结果。

将鸡蛋两端敲洞,使鸡蛋清流出。双层纱布过滤并混匀,按蛋清体积加入蒸馏水,轻轻搅拌5min,使蛋清溶液的稠度均匀。之后向蛋清溶液

中缓慢加入氯化钠细粉并轻轻搅拌。加完氯化钠后,再用氢氧化钠溶液调节pH,加入定量标准溶菌酶结晶作为晶种。4℃下静置。待结晶完全后,用布氏漏斗滤出结晶,即得到粗制的溶菌酶晶体。

将制得的粗品结晶溶于适量的蒸馏水中,调节酶液的pH至510,静置2h,过滤除去不溶物,收集起滤液并量出其体积,慢慢加入氯化钠细粉,用氢氧化钠溶液调节酶液pH至等电点,向酶液中加入定量标准溶菌酶晶种,4℃静置结晶。待结晶完全后,用布氏漏斗滤出结晶。重复上述

2　结果与分析

211　蛋清液稀释倍数对溶菌酶粗提取率的影响

固定pH为1018,氯化钠的添加量为蛋清溶

液体积的5%(w/v,以下同),在4℃下静置1w结晶,分别加入蛋清体积1、2、3、4倍的蒸馏水,提取溶菌酶的结果见图1。

由图1可见,蛋清液加入1倍体积蒸馏水稀

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钠加入量以5%左右为宜。214　蛋清溶菌酶粗提取条件的优化

按表1的因素水平,进行正蛋清溶菌酶提取的正交试验,结果间表2。

表2　蛋清溶菌酶提取正交试验结果

试验蒸馏水添加号

量(A)

1122333130011991149151

中国食品添加剂

酶液pH

(B)1223123111413241210210

氯化钠加入溶菌酶粗提取率量(C)

12231312113711981313176

(mg/100mL)

352488460356447396406389354

图1　水加入量对溶菌酶粗提取率的影响

12

释,溶菌酶提取率比其他稀释倍数的低很多,正

交试验可不考虑这一稀释倍数。212　酶液pH值对溶菌酶粗提率的影响

36789K1K2K3R

固定蒸馏水添加量为蛋清体积的2倍,钠加入量为蛋清溶液的5%,在晶,分别调节酶液819110、1015,2。由图2可见,酶液9151010、1015作为正交试验的条件

。

图2　氯化钠加入量对溶菌酶粗提取率的影响

213　氯化钠对溶菌酶粗提的影响

固定酶液pH为1010,添加蒸馏水的量为蛋清的2倍,在4℃条件下静置1w结晶,氯化钠加入量分别为4%、5%、6%、7%,测定溶菌酶粗提取率的结果见图3

。

对表2数据进行方差分析,结果表明3个因素对蛋清溶菌酶粗提 …… 此处隐藏：4037字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……