观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变(2)

　　2 结 果

　　2.1 高脂饮食诱导妊娠期糖尿病小鼠模型建立

　　为了评价建模效果，我们对妊娠期16.5 d的OGTT结果进行了重复测量方差分析，结果显示分组主效应（F=107.379,P=0.000），时间主效应（F=1187.974,P=0.000）及两者交互效应（F=40.621,P=0.000）均具有统计学差异。说明血糖值有随时间因素变化的趋势，且时间对血糖的影响会随着分组的不同而变化。接下来我们对同一时间点不同分组间的血糖值进行了比较（表1）。与正常组相比，模型组空腹血糖偏高（t=2.485,P=0.026）；给予葡萄糖灌胃后，模型组血糖下降缓慢，与正常组相比，其灌注后30 min（t=18.756,P=0.000）、60 min（t=7.766,P=0.000）、90 min（t=3.452,P=0.004）的血糖水平明显升高；通过AUC分析也发现，模型组较正常组有升高的趋势（t=10.926,P=0.000）。综上所述，模型组OGTT结果明显异常，调节葡萄糖的能力下降，高脂饮食诱导妊娠期糖尿病小鼠模型建模成功。

　　2.2 分娩后小鼠体质量增长趋势

　　3组小鼠分娩后均转普通饲料喂养。在分娩2个月后，3组小鼠体质量具有明显统计学差异（F=3.875,P=0.044）。与对照组相比，GDM组（P=0.028）及治疗组（P=0.031）的小鼠体质量持续升高。分娩5个月后，虽然治疗组的体质量增长速度较GDM组有所减慢，但2组间仍无明显统计学差异（P=0.097）。

　　2.3 GDM小鼠分娩后对葡萄糖的调节能力基本恢复正常但出现胰岛素抵抗

　　OGTT结果及曲线下面积（AUC）分析显示，葡萄糖灌注前，3组小鼠血糖值无明显统计学差异（F=2.009,P=0.169），灌注后2 h GDM组较对照组血糖值高（P=0.002），但3组的AUC并无明显统计学差异（F=1.624,P=0.230）。说明与对照组相比，GDM组调节葡萄糖的能力无明显差异（图2A、B）。ITT结果及AUC分析显示，与对照组相比，GDM组腹腔注射胰岛素后30 min（P=0.000）、60 min（P=0.008）血糖下降缓慢，其AUC明显升高（P=0.004），说明GDM组老年小鼠存在明显胰岛素抵抗。与GDM组相比，治疗组小鼠注射胰岛素后30 min（P=0.009）、60 min（P=0.026）血糖降低较快，AUC有降低的趋势，说明孕期二甲双胍治疗存在提高胰岛素敏感性的作用（图2C、D）。

　　2.4 进入老年期，GDM小鼠胰岛出现病理学改变，孕期二甲双胍治疗可以改善

　　3组小鼠的胰腺组织经HE染色后光镜下观察。对照组小鼠胰岛数量较多，面积大小不等，形态规则边界清楚。GDM组小鼠胰岛数量明显减少，胰岛面积萎缩，形态不一。治疗组小鼠胰岛数量较高脂组增多，胰岛面积与正常组类似，形态较规则，边界欠清（图3）。

　　2.5 Ki67在胰腺组织的表达

　　通过免疫组化染色，可以看到细胞增殖标记物Ki67主要定位于胰岛的细胞核（图4）。对照组胰岛部着色较深，而GDM组及治疗组染色较浅，其平均光密度分别为对照组0.149±0.109、GDM组0.006±0.003、治疗组0.016±0.0030.3组之间比较虽然无明显统计学差异（F=4.791,P=0.057），但两两比较发现，对照组较GDM组（P=0.032）和治疗组（P=0.042）Ki67的表达量升高。

　　3 讨 论

　　GDM是一种以代谢异常为主要表现的妊娠期并发症，其发病机制复杂，主要涉及2个关键环节，即胰岛素抵抗、胰岛β细胞分泌相对不足。妊娠中后期生理性血容量增加，胰岛素浓度降低，同时孕期增加的雌孕激素及胎盘激素具有拮抗胰岛素的作用，外周组织对胰岛素的敏感性下降，胰岛素需求增大。如果此时胰岛β细胞分泌的胰岛素不能代偿胰岛素抵抗的部分，糖代谢就会发生紊乱，进而发展为GDM.

　　虽然大多数患有GDM的女性在产后血糖值可以恢复正常水平。但是大量的研究[4-6,9]发现，这部分女性产后发生2型糖尿病、心血管疾病、代谢综合征的风险明显增加。说明虽然血糖值恢复了正常，但其体内的代谢紊乱并未完全消除。国内外的一部分临床研究[10-12]发现，GDM的产妇在分娩后依然表现出慢性胰岛素抵抗的状态。本研究也发现，GDM组的小鼠在分娩后体质量增长迅速；进入老年期后，虽然葡萄糖耐量实验表现正常，但其胰岛已经发生了萎缩，数量减少等病理学改变，且胰岛素敏感性下降，出现胰岛素抵抗。1995年Stern[13]提出的“共同土壤学说”认为胰岛素抵抗是糖尿病和心血管疾病的共同危险因素，同时，也有研究证明了代谢综合征、肥胖等代谢性疾病与胰岛素抵抗的相关性[13-15].因此，产后持续的胰岛素抵抗状态很可能是GDM远期危害的主要原因之一。

　　二甲双胍是常用的口服降糖药，其降血糖的机制主要包括[7]减少肠道对葡萄糖的吸收、抑制肝脏的糖异生及提高外周组织对葡萄糖的敏感性。同时，二甲双胍不通过刺激胰岛β细胞分泌胰岛素来维持血糖，由此可较好地保护受损胰岛功能，因此被广泛应用于糖尿病的治疗。但由于二甲双胍可通过胎盘屏障[16],故其应用于GDM治疗的安全性一直备受争议。目前一部分临床研究[17-18]已证明妊娠期应用二甲双胍可有效控制血糖，减少不良妊娠结局。然而，二甲双胍对母婴的远期影响仍知之甚少。本研究发现，孕期应用二甲双胍治疗GDM可减缓产后体质量增长速度。进入老年期后，其对胰岛素敏感性有保护作用，且对胰岛的病理学改变也有改善。

　　综上所述，我们通过高脂饮食建立了GDM的动物模型，旨在观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平，胰岛的形态学改变以及孕期二甲双胍治疗对母体的远期疗效。通过本研究证实GDM组的小鼠在产后血糖水平虽然可以恢复正常，但其胰岛素抵抗的状态持续存在。同时，老年期GDM组小鼠更容易发生肥胖、胰岛萎缩、数量减少、增殖能力降低。孕期应用二甲双胍可以有效改善小鼠胰岛素抵抗的状态，减慢体质量增加及胰岛的病理学改变，但是并不能增强胰岛的增殖能力。在后续研究中，我们将进一步探究二甲双胍在改善GDM远期预后中的作用机制，为GDM远期并发症的防治及二甲双胍的应用提供新的理论依据。

　　参考文献

　　[1] Schneider S, Freerksen N, R?hrig S, et al. Gestational diabetes and preeclampsia-similar risk factor profiles?[J]. Early Human Development, 2012, 88（3）：179-184.　　 …… 此处隐藏：1152字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……