实验三、 唾液淀粉酶的活性观察

实验三、 唾液淀粉酶的活性观察 实验三、

指导老师：刘建昌、 指导老师：刘建昌、池雪林

一、目的

掌握温度、pH、激活剂和抑制剂如何影 掌握温度、pH、 响酶的催化活性及其影响机理。 响酶的催化活性及其影响机理。

二、原理酶是由活细胞分泌的生物催化剂。 酶促化学反应进行的能力即称为酶活性(酶 酶促化学反应进行的能力即称为酶活性(酶 活力) 在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温 度即酶的最适温度 度即酶的最适温度 而能使酶活性达到最高时的pH即酶的最适pH 而能使酶活性达到最高时的pH即酶的最适pH 能使酶由无活性变为有活性或使酶活性增高 的物质称为酶的激活剂 的物质称为酶的激活剂 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的 抑制剂。 抑制剂。

本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化 因素影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶，唾液 淀粉酶的底物是淀粉。淀粉在该酶的催化下会随 着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到 各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。 而碘液能指示淀粉的水解程度。淀粉酶 淀粉 糊精 淀粉酶 麦芽糖 + 少量葡糖

蓝色) 加碘 (蓝色)

紫红、 紫红、暗褐或红色

棕黄色

三、试剂及器材(1)0.5%(w/v)淀粉溶液 要求新鲜配制。 0.5%(w/v)淀粉溶液 (2)稀碘溶液 (3)不同pH溶液 )不同pH溶液 ①pH 5.0缓冲液 5.0缓冲液 ②pH 6.8缓冲液 6.8缓冲液 ③pH 8.0缓冲液 8.0缓冲液 (4)0.5%(w/v)蔗糖溶液 0.5%(w/v)蔗糖溶液 (5)斑氏试剂 (6)1%(w/v)NaCl溶液 %(w/v)NaCl溶液 (7)1%(w/v)CuSO4溶液 %(w/v) (8)白瓷板(或比色板) (9)恒温水浴锅 (10)电炉 10)电炉

四、操作1..唾液淀粉酶应用液的制备 1..唾液淀粉酶应用液的制备 (1)每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。 (2)先用蒸馏水漱口，将口腔内的食物残渣清 理干净。 (3)口含约20mL蒸馏水，做咀嚼动作1-2min, )口含约20mL蒸馏水，做咀嚼动作1 2min, 以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入 一个干净的小烧杯中。

2.温度对酶活性的影响(1)取3支试管，按表4-2进行实验。 支试管，按表4 进行实验。试管管号 0.5%淀粉(mL) %淀粉 pH 6.8缓冲液 缓冲液(mL) 缓冲液 稀释唾液(mL) 稀释唾液 不同温度( 不同温度(℃) 1 5 0.5 0.5 冰水浴 2 5 0.5 0.5 37℃水浴 ℃ 3 5 0.5 0.5 沸水浴

(2)在干净的比色板上，于各孔分别滴2滴碘液。 )在干净的比色板上，于各孔分别滴2 (3)每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板 )每隔1min从第2支试管中取反应液1 孔

穴中的碘液混合，观察颜色的变化。 (4)待第2支试管中的反应液与碘液混合后颜色不再 )待第2 变化时，取出试管，向各试管滴加碘液3滴。观察记 变化时，取出试管，向各试管滴加碘液3 录各管颜色。说明温度对酶活性的影响。 录各管颜色。说明温度对酶活性的影响。

3.pH对酶活性的影响 pH对酶活性的影响 (1)取3支试管，按表4-3编号后进行实验。 )取3支试管，按表4管号 0.5%淀粉(mL) %淀粉 不同pH的缓冲液 不同 的缓冲液 (mL) ) 稀释唾液(滴) 稀释唾液 滴 pH5.0 pH6.8 pH8.0 1 2 2 — — 10 2 2 — 2 — 10 3 2 — — 2 10

摇匀后，将各管置37℃水浴中处理。 (2)每隔1min从pH6.8的试管中取1滴反应液滴于白 瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察颜色变化。 (3)待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液3滴。观 察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度。解释pH 对酶活性的影响。

4.酶的专一性(1)取2支试管，按4-4编号后进行实验。 )取2支试管，按4 管号 0.5%淀扮(mL) 0.5%蔗糖(mL) 稀释唾液(mL) 1 2 — 1 2 — 2 1

(2)将各管摇匀后，一起放入37℃水浴处理10min。 )将各管摇匀后，一起放入37℃水浴处理10min。 (3)取出试管，分别加入斑氏试剂2ml,混匀。 )取出试管，分别加入斑氏试剂2ml,混匀。 (4)将各管置于沸水浴中煮沸10-20min。观察并解 )将各管置于沸水浴中煮沸10-20min。观察并解 释结果。 释结果。

5.唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂 (1)取3支试管，按表4-5编号后进行实验。 )取3支试管，按表4管号 0.5%淀扮(mL) %淀扮 pH6.8缓冲液 缓冲液(mL) 缓冲液 1%硫酸铜镕液 (mL) % 1%氯化钠溶液 (mL) % 蒸馏水(mL) 蒸馏水 稀释唾液(mL) 稀释唾液 — 1 1 1 3 0.5 2 3 0.5 — 1 — 1 1 3 3 0.5 1` —

(2)将各管摇匀后，一起放入37℃水浴保温。 )将各管摇匀后，一起放入37℃ (3)每隔1min从第2支试管中取出1滴反应液滴于 )每隔1min从第2支试管中取出1 白瓷板上，滴加稀碘液1 白瓷板上，滴加稀碘液1滴，观察其颜色变化。 (3)待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-3滴。 )待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1 观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，并 观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，并 解释之。 解释之。