植物组织培养实验中相关的问题答案(2)

5.核酸斑点杂交技术（NASH） NASH是根据互补的核酸单链可以相互结合的原理，将一段核酸单链以某种方式加以标记，制成探针，与互补的待测病原核酸杂交，带探针的杂交物指示病原的存在。此法存在的缺点是在检测大量样品时，探针的分离比较困难〔33〕。

此外，PCR微量板杂交法〔17〕，蛋白质电泳法〔27〕也可以用来检测植物病毒。

8.植物组织培养如何克服玻璃化和褐变现象？

玻璃化指在组织培养过程中，有些植物的嫩茎、叶片往往会呈现半透明状，水浸状的现象，又称过度水化。玻璃苗的分化能力低下，难以增殖生根成苗，这是一种生理失调症。目前已报道出现玻璃化苗的植物已达7O多种。

随着玻璃化产生机理研究的深入，某些植物的玻璃化已得到了有效的控制。主要措施有：(1)选择不易玻璃化的基因型及部位做外植体；(2)采取改善氧气供应状况和通气条件，

解答了组培中玻璃化 培养基过软等相关的问题

控制温度，适当低温处理，降低容器内相对湿度；(3)适当提高蔗糖含量，降低培养基中的水势。

（4）适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素浓度，或者适当增加培养基中的Ca2+、Mg、Mn、K、P、Fe、Zn、Cu元素含量，降低N和Cl元素比例，尤其是降低氨态氮浓度，提高硝态氮含量；

（5）增加自然光照或控制温度，通过高、低温处理防治玻璃化；

（6）在培养基中添加间苯三酚、根皮苷、多效唑、矮壮素等添加物。

褐变包括酶促褐变和非酶促褐变，目前认为植物组织培养中的褐变主要是由酶促褐变引起的。酶促褐变必须具有酶、底物和氧3个条件。

由于PPO是一种含铜离子的蛋白质，因此，寻找良好的抗褐变剂可从3个方面人手：

(1)用将Cu络合掉使酶失活的物质，如植酸(PA)和乙二胺四乙酸钠盐(EDTA)等；(2)加入与酶蛋白和底物的结合部位能够结合的酶抑制剂，从而抑制醌类的产生；(3)加人能减少酚类或使醌类还原的物质，如活性碳（Ac）、抗坏血酸（Vc）、聚乙烯吡咯烷酮等。由于不同物种的PPO存在着性质上的差异，适宜不同植物抗褐变剂也会有所不同。从理论上讲，酶促褐变可以通过以下3种方法加以抑制：(1)除去引起氧化的物质——氧；(2)捕捉或减少聚合反应的中间物；(3)抑制有关的酶。

目前已在许多植物组织培养中发现有褐变现象，尤以木本植物组织培养中褐变严重。褐变现象主要发生在外植体，外植体的部位不同，取材时期不同，褐变程度亦不同，如油棕用幼嫩器官或组织，胚等作外植体进行培养，褐变较轻，而用高度分化的叶片作外植体，接种后很容易褐变。

选择适当的外植体进行预处理之后，选择适宜的培养基，在黑暗或弱光下进行培养，并在培养基中加入活性碳可以防止细胞褐变的发生和发展；在外植体接种后1～2天既转移到新鲜培养基上，使细胞在褐化之前及时转移可以大大减轻或避免褐化。