鸡传染性支气管炎病毒变异机制及致弱方法研究进展(2)

李永清［１８］在３２℃分别将Ｔｕ毒株、Ｘｉ毒株鸡胚连续传代至４６代、５１代，发现２种毒株毒力都显著降低，且病毒毒力无返强现象，对雏鸡具有较好的安全性和免疫原性。刘胜旺等口妇将ＩＢＶＬＤＬ０９１０２２野生强毒株进行低温应鸡胚传代培养，从３５℃开始每１０

代降低１℃，直至孵化温度达到３０℃，后期传代均为３０℃培养，连续传至７０代，最终获得了弱毒疫苗株

ＬＤＬ７０，经动物试验证明该毒株保护率高，可抵抗ＩＢＶ强毒的攻击。ＭａｒｋＷ等凹叩采用快速热处理法致弱ＧＡ０８毒株。其方法是采用５６℃水浴热处理病毒一定时间，然后接种于９ｄ～１１ｄ的ＳＰＦ鸡胚，仅用１０周就致弱了ＧＡ０８毒株，该毒株不仅能产生很好的保护抗体，而且对雏鸡无致病性。刘兴友等［２１］分离到一株ＩＢＶ变异毒株，将该分离毒株命名为

ＩＢＶ

ＺＺ２００４毒株，已送往国家毒种保藏中心，目前

正在进行ＩＢＶＺＺ２００４的致弱及反向遗传等一系列研究。刘兴友课题组结合实验室现有的条件，参照以上物理方法进行ＩＢＶＺＺ２００４毒株的致弱研究，在３２℃条件下鸡胚传代培养已传至３５代，对ＳＰＦ鸡胚已高度适应，该毒株的致病性、毒力稳定性及免疫原性研究有待后续试验证明。２．３基因工程方法致弱病毒

随着分子生物学技术的发展，特别是反向遗传技术的发展，可以按照人们的需要，改变病毒的基因组结构，使其出现满足要求的变化，且致弱时间短、稳定性好。ＩＢＶ的基因组较大，一般的分子生物学

技术不能用于ＩＢＶ的致弱，然而反向遗传技术的发

展为ＩＢＶ的致弱提供了技术支持。

反向遗传学是在获得生物体基因组全部序列的基础上，通过对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因插入或缺失、基因置换等，再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组，让其装配出具有生命活性的个体心２｜。其机理是将病毒的毒力相关基因进行敲除或突变、置换成弱毒株的基因序列，使其成为无毒或毒力减弱的毒株。Ｃａｓａｉｓ

Ｒ

等‘２３３发现用ＩＢＶ强毒株Ｍ４１一ＣＫ的Ｓ蛋白的胞外区置换弱毒株的相应区段，获得了一株无致病性的弱毒株；ＣａｖａｎａｇｈＤ等ｍ１利用反向遗传学技术将ＩＢＶ的ＯＲＦ３和ＯＲＦ５缺失后，获得了一株无致病

万方数据

性的重组病毒，在此基础上，又用致病性ＩＢＶＭ４１株的Ｓ基因置换该重组病毒的基因，发现该毒株仍无致病性，大剂量接种１８日龄的鸡胚，也没有明显的致病性，还可以诱导机体产生对抗Ｍ４１株攻击的

免疫保护反应。刘兴友课题组利用反向遗传技术，

通过长距离ＲＴ—ＰＣＲ方法构建了ＩＢＶＺＺ２００４毒株全长ｅＤＮＡ文库，为ＩＢＶＺＺ２００４毒株的致弱奠定了基础。

３小结与展望

近年来ＩＢＶ的广泛流行给世界的养鸡业造成了重大的经济损失。由于ＩＢＶ的高突变性，导致现有ＩＢＶ疫苗已不能有效预防和控制新型ＩＢＶ的流行。因此，根据病毒的变异机制，研制特异的弱毒疫苗将成为预防ＩＢＶ的有效途径。不管是鸡胚连续传代致弱，还是改变温度条件致弱均费时费力，而且病毒在传代过程中容易丢失，不得不从源头来找病毒。基因工程方法可以在短期内将病毒致弱，并有目的地进行病毒改造，把病毒的毒力相关基因进行突变或置换，使其成为无毒或弱毒的毒株，为以后研究高效、广谱、安全的ＩＢＶ弱毒疫苗提供了技术支持。总之，ＩＢＶ弱毒疫苗的研制是预防新出现ＩＢＶ必不可少的，在生产上合理的使用ＩＢＶ弱毒疫苗，加上严格的饲养管理措施，并结合当地的生产实际制定相应的免疫程序，会大大降低ＩＢＶ对养鸡业造成的经济损失。参考文献：

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ｔｈｅＮｐｒｏｔｅｉｎｏｆａｖｉａｎｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓｖｉ …… 此处隐藏：1555字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……