05实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验

实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳 蛋白质电泳 准备实验----------溶液的配置 溶液的配置

实验内容

一、变性蛋白质电泳系列溶液1、单体母液 (1,4,8组) 、 50 ml 组 15.00 g 丙烯酰胺 0.40 g 甲叉双丙烯酰胺 去离子水定容至50 ml ,定性中速滤纸过滤，棕 去离子水定容至 定性中速滤纸过滤， 定性中速滤纸过滤 色试剂 瓶4℃存放。 ℃存放。 2、 10% (w/v) SDS (2,4,9组) 10ml 、 % 组 SDS 1.0 g 10 ml 去离子水

3、分离胶缓冲液(4×,pH=8.80,50 ml)( 、分离胶缓冲液( × )(1,7,8组) , )( 组 Tris-Base(1.5 mol/L) 9.08 g 10%(w/v)SDS 2 ml % 用30ml去离子水溶解，再用浓HCl调节 到8.8,过 去离子水溶解，再用浓 调节pH到 ， 去离子水溶解 调节 定容到50ml,4℃存放。 滤，定容到 ℃存放。 4、浓缩胶缓冲液(4× ,pH=6.80,50 ml )( 、浓缩胶缓冲液( × )(3,5,10组) , 组 Tris-Base(0.50 mol/L) 3.03 g 10%(w/v)SDS 2ml % 加去离子水40 溶解 用浓HCl调pH到6.80,定容 溶解， 加去离子水 ml溶解，用浓 调 到 ， 到50ml,4℃存放。 , ℃存放。

5、10%的过硫酸铵(1ml) (现配现用) 、 %的过硫酸铵( ) 现配现用) 0.10 g 过硫酸铵 去离子水1.00 ml,4℃密闭存放。 去离子水 ℃密闭存放。 6、电极缓冲液(pH=8.30) 500 ml(1×)(2,6,9组) 、电极缓冲液 ( 组 Tris-Base 1.50g 7.23 g 甘氨酸 SDS 去离子水溶解。 去离子水溶解。

7、样品缓冲液储液(2×)( 、样品缓冲液储液( ×)(3,5,10组) 组 浓缩胶缓冲液( × 浓缩胶缓冲液(4×) SDS(固体干粉) (固体干粉) 甘油 溴酚兰 加去离子水溶解，室温保存。 加去离子水溶解，室温保存。 8、染色液 (3,7组) 、 , 组 考马斯亮兰R- 考马斯亮兰 -250 甲醇 冰醋酸 水

25 ml 12.5 ml 1g 5 ml 10 mg

1000ml 2.5 g 454 ml 92 ml 454 ml

9、脱色液(2,6,9组) 、脱色液( 组 甲醇 冰醋酸 水

1000 ml 456.00 ml 72.00 ml 472.00 ml

二、pH计的使用方法 计的使用方法手动标定 1、打开电源开关，使仪器进入 测量状态，按 、打开电源开关，使仪器进入pH测量状态 测量状态， “△”或 “△”或“▽”键，使温度显示值与溶液温度一 确定” 仪器回到溶液pH值测量状态 值测量状态。 致，按“确定”键，仪器回到溶液 值测量状态。 2、把用蒸馏水清洗过的电极插入一标准缓冲溶液中， 、把用蒸馏水清洗过的电极插入一标准缓冲溶液中， 模式”键一次(定位), ),待显示稳定后按 按“模式”键一次(定位),待显示稳定后按 确认” “△”或 “确认”键，按“△”或“▽”键，使仪器显示 值与溶液的标准pH值一致 再按“确认” 值一致， 值与溶液的标准 值一致，再按“确认”键，仪 器进入溶pH的测

量状态 的测量状态。 器进入溶 的测量状态。

3、把用蒸馏水清洗过的电极插入另一标准缓冲溶液 把用蒸馏水清洗过的电极插入另一标准缓冲溶液 模式”键一次(斜率), ),待显示稳定后 中，按“模式”键一次(斜率),待显示稳定后 确认” “△”或 按“确认”键，按“△”或“▽”键，使仪器显 示值与溶液的标准pH值一致 再按“确认” 值一致， 示值与溶液的标准 值一致，再按“确认”键， 仪器进入溶pH的测量状态 的测量状态。 仪器进入溶 的测量状态。 4、用蒸馏水清洗电极并擦干电极，即可对被测量的 、用蒸馏水清洗电极并擦干电极， 溶液进行测量。 溶液进行测量。

表3 分离胶的配制 Table 3 The confect of separating gel胶浓度 单体母液( ) 单体母液(ml) 去离子水( ) 去离子水(ml) 分离胶缓冲液( ) 分离胶缓冲液(ml) 10%APS(µl) % ( ) TEMED(µl) 12% % 9.60 8.40 6.00 100 36

表4 浓缩胶的配制备 Table 4 The confect of concentrating gel胶浓度 单体母液( ) 单体母液(ml) 去离子水( ) 去离子水(ml) 浓缩胶缓冲液( ) 浓缩胶缓冲液(ml) 10%APS(µl) % ( ) TEMED(µl) 5% % 0.75 3.00 1.25 40 12