生物药物分析期末复习题(整理版)(缩印版)(2)

1、酵母 酵母菌是研究基因表达最有效的单细胞真核微生物。其基因组小，世代时间短，有单倍体双倍体两种形式，繁殖迅速，无毒性。能外分泌，产物可糖基化。已有不少真核基因成功表达（干扰素等）

2、丝状真菌

优点：分泌能力强，能正确进行翻译后加工（肽剪切糖基化）有成熟的发酵和后处理工艺。

28、基因工程菌实现高密度发酵的方法？

1. 发酵条件的改进，培养基的选择，建立流加式培养方式，提高供氧能力

2. 构建出产乙酸能力低的工程化宿主菌

阻断乙酸产生的主要途径：对碳代谢流进行分流，限制进入糖酵解途径的碳代谢流，引

入血红蛋白基因

3. 构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌

29、包涵体的纯化？

前处理

胞外分泌型表达：离心,收集液相→浓缩→纯化。

胞内表达：

胞内可溶性表达：离心,收集菌体→细胞破碎→离心，收集上清→纯化

胞内周质表达：离心,收集菌体→低浓度溶菌酶或渗透压冲击等溶解目标物→离心,收集上清液→纯化。

不溶性包涵体：离心,收集菌体→细胞破碎→离心,收集沉淀→包涵体洗涤→目标蛋白变性溶解→复性→纯化。

30、什么是组织工程？组织工程的基因原理。

应用生命科学与工程学的原理与技术，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。

31、基因工程制药中，目标产品的质量控制。

药物质量控制包括以下要求：产品的鉴别、纯度、活性、安全性、稳定性、一致性。利用多学科的技术生物化学、免疫学、微生物学、细胞生物学和分子生物学。

1、产品的鉴别

肽图分析，氨基酸成分分析，部分氨基酸序列分析，

重组蛋白质的浓度测定和相对分子量测定，蛋白质二硫键分析

2、纯度分析

包括目的蛋白质含量测定和杂质限量分析。

（1）、目的蛋白，根据理化性质和生物学特性。

（2）杂质，包括蛋白质和非蛋白质杂质。

3、生物活性测定

需要动物体内实验和通过细胞培养进行体外效价测定。

4、稳定性考察

是评价药品要效性按安全性的重要指标，也是确定药品储藏条件和使用期限的主要依据。对温度、氧化、光照、离子浓度和机械剪切等环境因素都很敏感。

5、产品一致性的保证

生产周期长，影响因素多，必须对每一步都进行严格的控制。

32、什么是造血干细胞移植？造血干细胞移植的步骤。

是给予患者进行大剂量放化疗或其他免疫抑制剂等预处理，清除患者体内的肿瘤细胞、恶性克隆细胞或异常造血干细胞，然后移植正常的异体或自体造血干细胞，重建正常的造血和免疫功能，从而达到治疗的目的。

移植前处理

1、超大剂量的放疗、化疗尽量消灭肿瘤细胞，同时抑制患者的免疫系统，使供体者的造血干细胞可以顺利植入。

2. 采集供体者的造血干细胞（骨髓、外周血、脐带血），并与受体进行HLA配型；

3. 将造血干细胞输入到受体者体内，造血干细胞会自动定居到脊髓。

33、什么是单克隆抗体技术？简述单克隆抗体制备方法。

B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，将这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力。将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。

1）免疫脾细胞的准备2）骨髓瘤细胞的培养与筛选3）细胞融合4）阳性克隆的筛选

5） 克隆化：（1）显微操作法；（2）有限稀释法；（3）软琼脂法；（4）荧光激光细胞分类法；

6） 细胞的冻存与复苏7）单克隆抗体的制备筛

34、利用基因工程手段改造抗体主要在哪几个方面？

利用DNA重组技术和基因 工程手段生产的抗体包括人-鼠嵌合抗体、改型抗体、双特异性抗体、小分子抗体等。

小分子抗体

双特异性抗体：许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位点，使抗原分子上的两个表位交联或使两个抗原分子连接。将识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞表面分子的抗体连结在一起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。

抗体融合蛋白

抗原结合部位与生物活性蛋白结合，含Fc段的抗体融合蛋白—免疫黏附素。 Fc的作用：检测、纯化、

延长血清中半寿期

生物学效应功能

鼠单抗人源化

将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体。

恒定区人源化——人-鼠嵌合抗体

可变区人源化——人改型抗体

用抗体库技术进行人源化

人改型抗体（CDR移植）：

定义：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V）中互补决定簇（CDR）序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。RAb亦叫“重构型抗体”，因其主要涉及CDR的“移植”，又可称为“CDR移植抗体”。 意义：多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗

35、什么是噬菌体展示技术？

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时,外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。