实验二 植物组织培养培养基母液的配制

实验二 植物组织培养培养基母液的配制

实验二 植物组织培养培养基 植物组织培养培养基 组织培养 母液的配制

实验二 植物组织培养培养基母液的配制

简 介植物在自然状态下生长时，具有完整的营养 体，是属于自养型的，很多营养物质可以 自制，对外界营养条件的要求比较简单， 而在离体条件下生长的植物器官、组织和 整体植物不同，属于异养型，要求的营养 条件十分复杂，因此在人工合成培养基的 组成和制备上必须全面考虑，满足供应。

实验二 植物组织培养培养基母液的配制

一、实验目的 掌握植物组织培养培养基母液的配置过程。 二、实验材料 仪器 冰箱、天平(0.0001g) 容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺 标签纸、胶水

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药品 50 %酒精、95 %酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元 素、有机物、激素、铁盐等药品 蒸馏水

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三、实验步骤 按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有 机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。如 MS培养基各种母液的配制步骤如下： 大量元素母液： 大量元素母液： 包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序,将每种 药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺 序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应 单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定 容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容 后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养 基需吸取该母液l00 ml或50 ml。

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微量元素母液： 元素母液： 因用量少，为了称量精确和方便,常配成 100倍或1000 倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解， 混合在一起成为微量元素母液，每配1 L N6培养基需吸取 该母液10 ml或者1 ml。 铁盐： 铁盐： 在N6培养基中需要单独配制，它是由硫酸亚铁 (FeSO4 7H2O)2.78 g和乙二氨四乙酸二钠(Na2-EDTA) 3.73 g,分别溶解，混合后，用酒精灯加热半小时以上， 冷却后定容至1 L。冰箱过夜贮藏无结晶析出，否则重新 配制。每配l升N6培养基需加该铁盐母液5 ml。 有机物质： 有机物质： 主要指氨基酸，维生素类物质。它们大都是扩大1000 倍，分别称量，分别定容和储存，配制培养基时按需要的 量加入。

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植物激素： 植物激素： 常用的有生长素类如：2,4-D、 萘乙酸(NAA)、吲 哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA);细胞分裂素类：激 动素(KT)、6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT)。 配制时需要单个称量，根据需要可分别用酸、碱或酒精等 不同的溶剂溶解后 ,再用蒸馏水配制成所需的浓度，一般 为每ml含 0.1-2 mg,

配制培养基时按所需要的量分别加入， 本实验中的2,4-D和6-BA均配成1 mg/ml的母液。 在配制吲哚乙酸(IAA)母液时，先用几滴95%酒精 溶解完全后，加蒸馏水定容，否则会发生沉淀。而配制6BA母液时，要用少量的1 mol/L NaOH溶解；而配制2,4-D 时，可先用少量的95%酒精溶解。

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各种母液配制好后，要贴好标签，注明 母液的名称，配制1 L培养基需要的吸取量、 母液配制的日期，然后放入冰箱中储存。 一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年 以上，有机物质的母液保存时间在半年以 内，但若发现有沉淀或霉变，应立即重新 配制。

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三、注意事项 1、药品的质量问题： 为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注 意药品质量， 国内药品采用国际上通用标准，分为： 一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级； 二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级； 三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级； 四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。 各级均有一定的杂质含量限制范围，其它特殊用的试 剂也有特殊的标记，如光谱纯、层析用、组织培养用等。 植物组织培养一般用分析纯级试剂。

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2、如药品所带结晶水不同，应进行换算。 3、称量必需准确，一般用1-4/万的分析天平称量，特别如微 量元素及激素等，但有些药品不影响基本反应过程的如 蔗糖、琼脂等可用1/100粗天平称取。 4、所用的水必须纯净，一般用全玻璃蒸馏器二次蒸馏的重 蒸水或者达到一定标准的无离子水。 5、制备好的浓缩液应保存于冰箱中，储备液配置量要依据 使用频度而定，一般所制备的储备液最好于1-2个月内使 用完，不宜过长时间保存。