动物用维生素预混合饲料中VK3含量测定

2 0 1 1年第 3期 2 0 1 1年 3月

化学工程与装备C h e m i c a l E n g i n e e r i n g& E q u i l￣ a e n t 1 5 3

动物用维生素预混合饲料中 VK3含量测定朱伟(江苏江山制药有限公司，江苏靖江 2 1 4 5 0 0 )

维生素 K是一类能够促进血液凝固的萘醌衍生物， V K 1、 V K 2为天然产物，V k 3为人工合成，且活性最强，在饲料中添加的都为 V K 3的亚硫酸氢钠盐，即亚硫酸氢钠甲萘醌。本

量瓶内，真空干燥，甲醇定容至 1 0 m l,过滤，进样。

5色谱条件A G I L E N T L C 1 2 0 0 高效液相色谱仪 A G I L E N T C 1 8 1 5 0 . 4 6 m m 5 u m 色谱柱流动相柱温流速

法参考 G B/ T 1 8 8 7 2— 2 O 0 2‘饲料中维生索 K 3的测定高效液相色谱法》,用三氯甲烷氨溶液提取维生素 K 3并转化为游离甲萘醌，蒸干三氯甲烷，残渣用甲醇溶解。用高效液相色谱测定，维生紊 K 3经反相 C 1 8柱分离，紫外检测器检测，外标法计算。

甲醇：水： 7 5:2 53 O℃

l m l/ m i n

检测波长 2 5 1 i r m

1试剂和材料 水 1 8 . 6 M Q 超纯水

进样量

2 0 u l

6计算维生素 K 3含量 (以甲萘醌计， m g/ k g )= ( C标幸 A样. 1 2 5 )/( A b k, w样 )

三氯甲烷甲醇氨水

分析纯

色谱纯 2 5%分析纯

式中

C标一甲萘醌对照品溶液浓度。u g/ m l A标一一甲萘醌对照品溶液中甲萘醌峰面积， h样——一样品溶液中甲萘醌峰面积，

硅藻土和无水硫酸钠的混合物：按质量比 3+ 2 0混合均匀

甲萘醌对照品2仪器设备

中检所提供

含量

l O o 9 6

W样——样品溶液称重，g7标准曲线和线性范围

M i l 1 i p o r e超纯水机

旋转振荡器赛多利斯

1 5 0 r/ m i n B P 2 1 1 D天平

真空干燥箱A G I L E N T L C 1 2 0 0 高效液相色谱仪。

3对照品溶液配制甲萘醌标准储备溶液：称取约 5 0 a r g甲萘醌对照品，溶

于

5 0 m l甲醇中，为甲萘醌标准储备溶液，浓度约为 l m g/ m l。 4℃冰箱内可存储一周。甲萘醌对照品溶液：精确吸取甲萘醌标准储备溶液

l m l,甲醇稀释并定容至 2 0 0 m l,浓度约为 5 u g/ m l,临用现配

4试样溶液制备根据样品中甲萘醌含量，称取样品若干 (折合甲萘醌约 6 0 0 u g ),于 l O O m l棕色容量瓶中，准确加入 2 5 m l三氯甲烷，

旋转震摇 2 m i n,再加 3 m 1 2 5%氨水旋转震摇 3 m i n,加入 5 g硅藻土和无水硫酸钠的混合物，于旋转震摇器上充分震摇称取对照品 5 0 . 0 5 m g .甲醇溶解并定容至 5 0 m l,为储备

3 o m i n,取出，中速滤纸过滤，吸取 2 m 1滤液于 l O m l棕色容

溶液，浓度为 1 . O 0 1 m g/ m l,分别吸取 0 . 5、0 . 8、1、1 2、

l 5 4

朱

伟：动物用维生素预混合饲料中 V K 3含量测定

L 5 m l,甲醇稀释并定容至 2 0 0 m l,分别进样各三针，进样量2 0 ui。

5, O 0 5 0 u g/ m l甲萘醌溶液，对照品溶液进六针，样品溶液每份进两针。

对照品溶液峰面积分别为：7 3 5 . 2 7 3 4 . 1 7 3 3 . 5" P 3 5 . 1 7 3 4 . 2 7 3 4 . 3

峰面积平均值为：7 3 4 . 4

8 V K 3测定重复性验证

称取鱼用饲料各 0 . 1 2 5 g,共六份，按供试溶液制备方法处理后，进样，对照品为 5 . O 0 5 0 u g/ m l甲萘醌溶液，对照品溶液进六针，样品溶液每份进两针。 对照品溶液峰面积分别为：7 3 4 . 9 7 3 3 . 1 7 3 2 77 3 2 . 2 7 3 2 . 2 7 3 2 . 3

峰面积平均值为：7 3 2 . 9

R S D:

0 . 1 5%

窘回收率测试称取鱼用饲料无 V/ ( 3空自料各 0 . 1 2 5 g,共 9份。第1, 2,3份添加 1 . O 0 1 m g/ m l储备液 0 . 4 m l,4,5,6份添加 1 . 0 0 1 m g/ m l储各液 0 . 5 m l,7,8,9份添加 1 . O 0 1 m g/ m l储

瘩液 0 . 6 m l。按供试溶液制备方法处理后，进样。对照品为

样品份号

峰面积

峰面

积平均值

回收率(应在 9 5 9 6— 1 0 5% )

同级回收率 (应在 9 5%一 l 0 5% )

参照 G B/ T 1 8 8 7 2 - 2 0 0 2‘饲料中维生素 K 3的测定高效液

饲料中 V K 3的含量测定，并进行了基本的方法验证，证明本

相色潜法'制定了本方法用于我司生产的水产动物用顶混合

方法完全适用于水产动物用预混合饲科中 y K 3的含量测定.