I型鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank发表的DHVI的基因序列,设计了1对针对DHVI保守区的特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭病毒性肝炎病毒快速鉴别诊断的RT-PCR方法,扩增片段大小为632bp。试验表明,RT-PCR法具有很强的特异性,且该方法的敏感性明显高于常规的检测方法。对鸭病毒性肝炎的病料检测证明,该方法能有效鉴别DHV,特异性良好。

浙江农业学报 At A r u ua hj nes 2 1:0~1,0 0 c gi h reZ ea gni2 ( ) 1 a c i s 3 2 1

I鸭肝炎病毒 R—C型 T P R检测方法的建立魏雪涛张晓勇。李银刘宇卓张敬峰，,,,(江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心，苏南京江2 0 1浙江省嘉兴市出入境检验检疫局，江嘉兴 3 4 0 ) 10 4;浙 10 1

摘

要：根据 G n ak发表的 D VI eBn H 的基因序列，设计了 1对针对 D V I H 保守区的特异性引物。通过对反应

条件的优化，建立了鸭病毒性肝炎病毒快速鉴别诊断的 R—C TP R方法，扩增片段大小为 6 2b。试验表明， 3 pR .C TP R法具有很强的特异性，且该方法的敏感性明显高于常规的检测方法。对鸭病毒性肝炎的病料检测证明，方法能有效鉴别 D该 HV,异性良好。特 关键词：型鸭肝炎病毒； TP R;断 I R—C诊中图分类号：82￥ 5文献标识码： A文章编号：04—12 (0 0 0 0 1 0 10 5 4 2 1 ) 1— 0 0— 4

Esa ih e t o t bl m n f RT. s PCR e h d f r de e tng Du k H e t i r s I m t o o t c i c pa i s Viu tW EIX eto, HANG Xioy n I n, I —h o, HAN J gfn u—a Z a—o g,L L U Yu z u Z Yi G i— g n l e

( s e r ay d i, ins A ae y f gi l rl c ne, e aoao o A ia Diae Da - 疵 efVt i r Mewn Jagu cdm A rut a Si cs KyL brtr f nm l s s i o en c o c u e y e s g nscadI m nl y Mi t gi tr N t n l et fr n ier gRsac e r r ipout, ot n m u o g, n r o r u ue ai ne o gne n e r o Vt n y Bo rdc i o s iy fA c l o C r E a i e hf ea i - sN ni 10 4 C i, i i 把— iIset na dQ aat eB r u J x g34 0, hn ) aj g2 0

1, hn J xn n a a g r xtnpco n u rni ue, i i 1 0 1 C ia e i n a an A s at A cri e osre ee eu neo uk eaisV u ( H )i G n ak o e a e b t c: codn t t nevdgn qec f c p ti i sID V I n eB n, n i o t r g oh c s D H t r p r fhs e i c p i r e e d sg e .A a i i g o t e h iu fR P R w s e tb ih d b p i zn h e cin p cf r i me sw r e in d r p d d a s c tc n q e o T— C a sa l e y o t n i s miig t e r a t o

c n i o .T e DN s g ns a l e e e 6 2 b . T e e p rme t h d p o e h tRT P R o s se ih o d t n h A e me t mp i d w r 3 p i i f h x e i n s a r v d ta - C p s e s d a h g 【s e i ct An h e iiiy ts e ut n i ae ha h p cf i i y. d t e s nstvt e trs lsi d c t d t tte RT— PCR s r e iie ta h o v n in lmeh Wa mo e s nstv h n te c n e to a t

o .Dee t n o ed s mpe r m i ld s a e u k lo c n r d t a h t o fR P o l f cie y d tci f l a ls f o i f o v r ie d d c sa s o f me h t e me h d o T- CR c u d e e t l a s i t vi niy t e if ci n o de tf h n e to fDHV.

Ke r s y wo d:Du k He a i iu; T P R; ig o i c p t i Vr s I R— C d a ss t s n

鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种高度致死性的病毒性传染病¨。该病的特征是发病急，播 J传快，死亡率高， I诊断表现为角弓反张，理变临床病化为肝炎和出血，常给养鸭场造成重大的经济损失。鸭肝炎病毒 ( ukH p ti V u, H有 3 D c eai i s D V) t r s

个血清型， II, I,国主要流行的鸭肝即， I型我 II

多种检测 D V I原的方法，免疫电镜、 o H抗如 Dt - E IA和病毒中和试验等， LS这些方法在 D V I H 的诊断中各有优势]。而 P R技术却以其快速、 C

敏感和特异等优点在动物疫病检测中得到广泛应用 j而且随着 P R技术的不断改进，种针， C这

对病原核酸的诊断方法表现出更准确、敏和特灵异的特点，已成为动物病原检测的重要方法现之一。有效地防控鸭病毒性肝炎的暴发与蔓延，关键在于早期快速、感和特异的鉴别诊断。因敏

炎病毒血清型为 I,型以上 3个血清型在血清学上有着明显的差异，交叉免疫性。目前，无已有收稿日期：0 9一l 3 20 0—1基金项目：苏省农业自主创新资金项目( x0 17江 c (9) 1 )

此，立一种鸭病毒性肝炎病毒 R .C建 TP R分子诊断技术有着重要的理论意义和应用价值。

作者简介：魏雪涛 (9 9一)女， 17,内蒙古集宁人，士，硕助理研究员，主要从事家禽重大疫病流行规律、断、测和控制技术研诊监究。E m i: exea@16 cm;e: 2 44 90 7 al w i to 2 .o T l 0 5 3 04 . u