微生物综合性实验设计方案

设计性试验

——设计方案

题 目：饮料、水中细菌总数的测定及产酸菌的鉴定 指导老师: 高慧娟 院 别： 农业与生物技术学院 专 业: 生物科学 组 别： 第三组 完成日期：2011年12月21日星期三

饮料、水中细菌总数的测定及产酸菌的鉴定

——实验设计

研究背景及意义

水是生命之源，人类无法离开她而生存，然而当前水质污染令人堪忧，饮用水安全无法保证。水又是微生物广泛分布的天然环境，无论是地表水还是地下水，甚至雨水或雪水，都含有多种微生物。根据细菌对氧的需求情况，可分为三大类：厌氧菌、兼性厌氧菌、好氧菌。当水体受到人、畜粪便、生活污水或某些工业废水污染时，水中厌氧菌和兼性厌氧菌等微生物的数量可大增。水环境研究显示我国70%以上的河流受到了污染，全国湖泊约有75%的水域受到显著污染，90%以上城市水域污染严重。因此，水中的细菌总数测定，特别是肠道细菌的检验，在环境质量评价、环境卫生监督等方面具有重要意义。但是直接检查水中各种病源微生物，方法较为复杂，有的难度大，而且检查结果为阴性，也不能保证绝对安全。所以，在实际工作中经常以检查水的细菌总数，特别是检查作为粪便污染的指示菌，来间接判断水体污染状况和环境卫生学质量。

常用的指示菌或其它指示微生物有：总大肠杆菌群、粪大肠杆菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌、双歧杆菌属、肠道病毒、大肠杆菌噬菌体、沙门氏菌属、志贺氏菌属、铜绿假单胞菌、葡萄球菌属、副溶血弧菌等。此外，还有水生的真菌、放线菌和线虫。

水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物含量越大。所谓细菌总数是指1ml或1g检样在牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃经24h培养后，所生长的菌落数。本实验所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌数，它反映的是检样中活菌的数量。

所谓大肠菌群，是指在37℃、24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内德细菌组成。水的大肠菌群数是指100ml水样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数表示。 1.实验内容

1.1饮料、水中细菌总数的测定

1．水样的采取（饮料、自来水、湿地水、人工湖水） 2. 水中细菌总数的测定 3．计菌落数 1.2产酸菌的鉴定

1．无菌操作倒平板、划线分离，恒温培养 2．菌落观察 2.实验器材 2.1培养基

2.1.1 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏1.5g，NaCl2.5g,琼脂10g，自来水500ml,Ph7.2-7.4；

2.1.2 伊红美蓝培养基： 蛋白胨2.5g，乳糖2.5g，磷酸氢二钾0.5g，伊红0.1g，美蓝0.012g，琼脂5g,蒸馏水 250ml，Ph7.2。 2.2试剂：无菌水

2.3仪器：高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、光学显微镜、培养箱、培养皿（90mm或60mm）、试管、移液管、天平、电炉、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、接种针（环）、擦镜纸 3、实验方法

3.1饮料、水中细菌总数的测定 3.1.1水样的采取

自来水：先将水龙头用酒精擦拭、灭菌，然后再放水5—10分钟，最后用无菌容器接取水样。

湿地水、人工湖水：将无菌的带玻璃塞瓶瓶口向下浸入距水面10—15cm的深层水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水流入瓶中，当取完水样后，塞好瓶塞，再从水中取出。 3.1.2水中细菌总数的测定

取三个无菌试管并标号，分别加入4.5ml无菌水，取0.5ml湿地水样注入1号试管摇匀，再从1号试管中取0.5ml注入2号试管内，如此稀释至3号试管内，稀释成浓度梯度为10-1、10-2、10-3；

分别取0.2ml的样液（饮料、自来水、湿地水、人工湖水、无菌水）加入牛肉膏蛋白胨培养基中，每种样液涂布2个平板。 3.1.2计菌落数

将涂布好的平板置于37℃恒温箱中培养24h,计平板上的菌落数。 3.2产酸菌的鉴定

取0.2ml的湿地水涂布在伊红美蓝培养基，置于37℃恒温箱中培养24h,计平板上的菌落数。 4 实验方法与步骤 4.1 实验流程

水样的采取→水样稀释→ 倒平板→ 涂布→ 培养→ 菌落计数、鉴定产酸菌

4.2 制作中的几个关键因素

（1）水样采集后，应速送回实验室测定，若来不及测定，应放入4℃冰箱中保存。 （2）计菌数时，应选择平均菌落数在30—300之间的区域。 （3）为保证实验测定结果的精确性，可设置多个浓度梯度。 5．预期目的

（1） 熟悉水样的采集及细菌总数的测定方法； （2） 掌握平板菌落的计数原则及产酸菌的鉴定。 6.结果预测

涂布有无菌水的培养基中不含有菌落；涂布有样液的培养基中菌落数量的关系：自来水<处理后的饮料水<人工湖<湿地水；湿地水涂布在伊红美蓝培养基上可能会有紫色金属光泽出现。 7.结果记录

将测定结果记录在表中

【参考文献】

（1） 陈玮，董秀芹.微生物学及实验实训技术[M].北京:化学工业出版社，2007 （2） 唐突.食品卫生检测技术[M].北京: 化学工业出版社，2006

（3） 宋思杨，楼市林.生物技术概论[M].第二版. 北京:科学出版社，2005

（4） 徐飞，王开元，江迎春.水中细菌总数测定的优化研究[J].《今日科技》，第一期.2007