气相法测定盐酸大观霉素残媒FDA方法验证

气相法测定盐酸大观霉素残媒FDA方法

　2006,40(8):19～20/秦朝英,等　　　　　　　　　中国兽药杂志 19

气相法测定盐酸大观霉素残媒FDA方法验证

秦朝英,闫春芝,王连尧,宋瑞芝,廖萍,周桂云

(山东鲁抗医药股份有限公司质监中心,山东济宁　272120)

[收稿日期]2006

01

08　[文献标识码]A　[文章编号]1002

1280(2006)08

0019

02　[中图分类号]TQ460.72

[摘　要]　本文采用气相色谱法测定了盐酸大观霉素非无菌粉中丙酮的含量,以对FDA方法进

行验证。

[关键词]　气相色谱;FDA认证;毛细管色谱柱;残留溶媒;丙酮

　　大观霉素非无菌粉是兽用抗生素,在生产过程中会有少量丙酮残留下来,这对动物的健康有不利影响,目前我国及美国等许多国家对大观霉素非无

[1]

菌粉中丙酮的含量做出了严格的规定,酮的含量,结果如下1　材料1.1　仪器　GC24890D型气相色谱仪,配氢熖离子化检测器;7694E型自动顶空进样器;HP25毛细管色谱柱(30m×0.25mm×1.0μm);Agilen公司产品。AE100天平,METTER公司。超声波清洗器,山东济宁超声波厂。1.2　试药与试剂

1.2.1　试药　盐酸大观霉素非无菌粉,批号0508073、0508074,山东鲁抗医药股份有限公司。1.2.2　试剂与材料　丙酮、正丙醇,AR级;纯化水,本公司自制。氮气、氢气、空气及Agilen公司配套的顶空瓶。2　方法与结果2.1　溶液的配制方法

2.1.1　内标液的制备　精密吸取正丙醇100uL于100mL容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度。浓度为0.8mg/mL,摇匀,备用。2.1.2　对照品溶液的制备　精密吸取丙酮100uL于100mL容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,浓度为0.79mg/mL,摇匀,做为对照品储备液。再精密吸取此溶液1.0mL于20mL顶空瓶中,精密

加入内标液1.0mL,再加入8.0mL纯化水,摇匀,。

2.3取本品约0.8g,精密

,,精密加入内标溶液.再加入9.0mL纯化水,摇匀。2.2　仪器条件

2.2.1　色谱条件　进样口温度180℃;柱温60

℃;载气为氮气;载气流速30mL/min;进样体积1.0μL,分流比50∶1;检测器温度250℃。2.2.2　自动顶空进样器条件　顶空炉温85℃,气

体传速线温度100℃,顶空瓶平衡时间为30min,样品瓶加压时间为0.20min,定量管充样时间0.20min,进样时间1.00min。

2.3　系统适用性　在上述色谱条件下,取对照品

溶液顶空进样,所得色谱图中,丙酮峰与正丙醇峰的分离度为8.04,理论板数为112858,拖尾因子为1.01。取对照品溶液,连续进样5次,丙酮峰与正

丙醇峰峰面积之比的相对标准偏差(RSD)为3.84%(表1),小于5%,符合要求。

表1　系统适用性实验

序号

12345

丙酮峰面积

4934.45035.25333.94980.35680.0

正丙醇峰面积

5344.25777.35484.65437.16148.2

峰面积比

0.920.870.970.920.92

RSD

3.84%

作者简介:秦朝英(1971年～),女,高级化验员,助理工程师。E2mail:qinchaoying@http://www.77cn.com.cn

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2.4　测定方法　分别取对照品溶液和供试品溶液10mL水,分别作为2N、3N、4N、5N、6N对照溶液,

顶空进样,记录色谱图,按内标法以峰面积计算,供试品溶液所得丙酮峰与正丙醇峰峰面积之比应小于标准品中丙酮峰与正丙醇峰峰面积之比。结果见表2,色谱图见图1。

表2　丙酮与内标峰峰面积比

批号丙酮峰面积

对照品溶液4934.4

5035.2

每种浓度平行3份在上述色谱条件下测定。结果

见表3。

表3　检测限测定结果

溶液浓度/(g mL-1)

信号值

48

494810397101128140139177174172233226232信号平均值

49

S/N

—

正丙醇峰面积

5344.25777.35412.26056.6

峰面积比

0.920.870.470.

53

7.0×10-6

1002.0

供试品溶液2547.43212.2

1.05×10-5

1362.8

1.4×10-5

1743.6

1.75×10-5

2304.7

1-5

3417.0

　　由表3得,信噪比为2时,样品浓度为7.0×10

-6

g/mL,此浓度即为本方法检测限。

2.6　专属性2.6.1　试液制备

试液(a):精密吸取纯化水10.0mL于20mL顶空瓶中。

试液(b):精密吸取内标液1.0mL于20mL顶空瓶中,精密加入9.0mL纯化水,摇匀。

试液(c):精密吸取对照品储备液1.0mL于20mL顶空瓶中,精密加入9.0mL纯化水,摇匀。

试液(d):取本品约0.8g,精密称定于20mL顶空瓶中,精密加入10.0mL纯化水,摇匀。2.6.2　检测结果　在本方法的色谱条件下,取上述试液,依次顶空进样,各色谱图与被测溶剂峰保留时间相同处没有其他杂质峰出现,丙酮与其他相邻峰分离度不小于1.5。3　结论与讨论

1.丙酮峰;2.正丙醇峰;A-对照品溶液;B-供试品溶液

图1　丙酮的气相色谱色谱图

2.5　检测限　精密吸取纯化水10.0mL于20mL

顶空瓶中,平行制备3份,按本方法的上述色谱条件顶空进样,计算噪音水平N。

根据噪音水平N制备浓度为2N～6N的对照品溶液,每种浓度制备3份,顶空进样,计算S/N。当S/N=2/1时,对照品溶液的浓度即为本方法的检测限。根据噪音水平,分别吸取对照溶液70、

105、140、175、210μL于20mL顶空瓶中,精密加入

在上述色谱条件下测定,该方法测定盐酸大观

霉素非无菌粉中丙酮的含量,专属性好,检测限符合规定。参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版(二部)[S].

北京:化学工业出版社,2005.附录54-56