第二章_发酵菌种选育

第二章 生产中常用菌种的分离、 选育和保藏第一节 菌种的分离筛选

第二节 培养分离第三节 工业微生物育种 第四节 菌种的保藏及活化

带图象分析系统的微生物菌种 显微观察装置

第一节 菌种的分离一、菌种的来源

根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂 或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。

二、优良菌种的性能 在较短发酵周期内能产生有价值的发酵产品； 能在廉价原料的培养基上快速生长并大量合成目的产物 ； 对生长条件要求不高； 易于从发酵液中提取产物； 生长速度快，不易被污染； 对人类、动植物以及环境没有危害； 遗传特性稳定，不易退化，易于进行基因操作。

三、分离思路 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照 生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法， 快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必 须重新进行分离纯化。 有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合 理先进的设备与之配合。

四、新种分离与筛选的步骤 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生 长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所 需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性 包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特 性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温 度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工 艺等。

菌种筛选主要步骤 调查研究及查阅充分的资料 ↓ 设计实验方案 ↓确定采集样品的生态环境 采样 ↓确定特定的增殖条件 增殖培养 ↓确定特殊的选择培养基及可能的 ↓定性或半定量快速检出法 平板分离 ↓

原种斜面 ↓确定发酵培养基础条件 筛选 ↓ 初筛(1株1瓶) ↓ 复筛(1株3~5瓶) ↓结合初步工艺条件摸索 再复筛(1株3~5瓶) ↓ 3~5株 ↓ 单株纯种分离 ↓ 生产性能试验 ↓→毒性试验 菌种鉴定

(一)采样1、采样对象 以采集土壤为主。 一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细 菌和放线菌为主；富含碳水化合物的土 壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一 些野果生长区和果园内。 采样的对象也可以是植物，腐败物品， 某些水域等。

从自然界筛选

2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 3、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去 表土，取离地面5-15cm处的土约10g,盛入清洁的 牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标

记，记录采样时 间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样 中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步 分批寄回，以便及时分离。

(二)增殖培养 为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物 至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择性 培养基，选择一定的培养条件来控制。 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维 素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那 么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长， 而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段 的纯种分离就会顺利得多。

(三)培养分离 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微 生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。 在这—步，增殖培养的选择性控制条件还应进 一步应用，而且控制得细一点，好一点。纯种 分离的方法有划线分离法、稀释分离法。

1.稀释平皿分离法 1.稀释平皿分离法(1)稀

释

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1g

100ml9ml

9ml

9ml

9ml

9ml

9ml

1/100

1/1000 10-4

10-5

10-6

10-7

10-8

1.稀释平皿分离法a.倾注平皿分离法

b.涂布平皿分离法

2.平皿划线分离法 a. 分区划线分离法

b. 连续划线分离法