三种常用方法保存临床常见菌种的比较

第２４卷第３期甘肃科学学报Ｖ０１．２４Ｎｏ．３２０１２年９月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧａｎｓｕＳｃｉｅｎｃｅｓＳｅｐ．２０１２

三种常用方法保存临床常见菌种的比较

彭俊华，薛荣利，张媛媛，朱晓红，李泽慧

（兰州军区兰州总医院检验科，甘肃兰州７３００５０）

摘要：比较３种保存临床常见菌种常用方法．临床分离非苛养茼５５０株分别用半固体琼脂法、细

茵湿种牛奶冻存法和纸片冻存法进行保存，比较保存１个月、１２个月、３６个月后３种方法的菌种存

活率．半固体琼脂法、细茵湿种牛奶冻存法和纸片冻存法保存１个月时的茵椿平均存活率分别为

９８，６ｏＡ、１００％和１００％，３６个月时的茵株平均存活率分别为４５．１％、９０．６％和８６．１％．冻存法在长

时间保存菌株时效果明显优于半固体琼脂法，３种方法对化脓性链球菌的保存效果不佳．结果表明，

３种方法均能很好地保存临床常见茼，方法简便易行，各实验室可依具体要求逸甩．，

关键词：菌种保存；细茵存活率；冻存法

中图分类号：Ｒ４４６．５文献标志码：Ａ文章编号：１００４＂０３６６（２０１２）０３－００８８－０３

ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＴｈｒｅｅＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＣｏｍｍｏｎＣｌｉｎｉｃａｌ

ＢａｃｔｅｒｉａｌＰｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ

ＰＥＮＧＪｕｎ－ｈｕａ，ＸＵＥＲｏｎｇ—ｌｉ，ＺＨＡＮＧＹｕａｎ－ｙｕａｎ，ＺＨＵＸｉａｏ－ｈｏｎｇ，ＬＩＺｅ－ｈｕｉ

（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＬａｎｚｈｏｕＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，ＬａｎｚｈｏｕＣｏｍｍａｎｄ，ＰＬＡ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００５０，Ｃｈｉｎａ）

ｏｒｄｉｎａｒｙｍｅｔｈｏｄｓｏｆｐｒｅｖｅｒｖｉｎｇｃｏｍｍｏｎｃｌｉｎｉｃａｌｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｔｈｅｓｅｍｉ－ｓｏｌｉｄ

ｍｉｌｋｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｔｈｏｄ（ＭＦＭ），ａｎｄｔｈｅｐａｐｅｒｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｔｈｏｄ（ＰＦＭ）ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｐｒｅ—

５５０ｓｔｒａｉｎｓｏｆｎｏｎ－ｆａｓｔｉｄｉｏｕｓｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｔｈｅｉｒｂａｃｔｅｒｉａｌｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｓ（ＢＳＲ）ｗｅｒｅ

ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｆｔｅｒｂａｃｔｅｒｉａｌｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｆｏｒ１，１２，３６ｍｏｎｔｈｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＢＳＲｏｆ

ｗｅｒｅ９８．６％，１００％ａｎｄ１００％ａｆｔｅｒｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇｆｏｒ１ｍｏｎｔｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅＢＳＲｏｆ

ｗｅｒｅ４５．１％，９０．６％ａｎｄ８６．１％ａｆｔｅｒｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇｆｏｒ３６ｍｏｎｔｈｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｔｏｒ－

ａｇｅｅｆｆｅｃｔｏｆｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｗａｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＳＳＭａｆｔｅｒｌｏｎｇｔｉｍｅｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ．Ｂｕｔｆｏｒｔｈｒｅｅｍｅｔｈ—

ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｗａｓｎｏｔｇｏｏｄ．Ａｓａｒｅｓｕｌｔ，ｔｈｅｔｈｒｅｅｍｅｔｈｏｄｓａｒｅｇｏｏｄｆｏｒｔｈｅｃｏｒｎ—

ｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓ；ｔｈｅｙａｒｅｓｉｍｐｌｅａｎｄｆｅａｓｉｂｌｅ。ＳＯａｎｙｌａｂｏｒａｔｏｒｙｃａｎｓｅｌｅｃｔｔｈｅｍａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｉｔｓｓｐｅｃｉｆｉｃｗｏｒｄｓ：ｂａｃｔｅｒｉａｌｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ；ｆｒｅｅｚｉｎｇｍｅｔｈｏｄ

低温、干燥和隔绝空气可达到保存菌种的作用．

常用的菌种保存方法有半固体琼脂法、低温冷冻法、１材料和方法

冷冻真空干燥法［１’２］．近年来采用低温冷冻保存菌１．１菌株来源

种的报道较多［３“］．实验室采用半固体菌种保存法、收集２００８年３月～１０月来自临床病人分离菌细菌湿种牛奶冻存法、纸片冻存法保存临床分离非株５５０株，其中金黄色葡萄球菌５９株，凝固酶阴性苛养菌，并对保存效果进行了对比．葡萄球菌６３株，大肠艾希氏菌１２０株，肺炎克雷伯收稿日期１２０１２—０６—１３

作者简介；彭俊华（１９６６一），男。博士，副主任医师．Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｕｎｈｕａ—ｐ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｒｎＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｅｅｍｅｔｈｏｄ（ＳＳＭ），ｔｈｅｓｅｒｖｅｃｏｍｐａｒｅｄＳＳＭ，ＭＦＭ，ＰＦＭＳＳＭ，ＭＦＭ，ＰＦＭｏｄｓ，ｔｈｅｍｏｎｒｅｑｍｒｅｍｅｎｔｓ．Ｋｅｙ

第２４卷彭俊华等ｔ三种常用方法保存螨床常见菌种的比较８９菌１２１株，痢疾志贺氏菌１０株，沙门菌属１３株，铜③纸片冻存法：无菌镊子取纸片并刮取复苏后纯培绿假单胞菌６０株，鲍曼不动杆菌４４株，白色假丝酵养１８ｈ后的４＂－－５个菌落，置于灭菌好的１．５ｍＬ带母茵３９株，化脓性链球菌２１株．按全国临床检验盖塑料离心管中，每管１片［３］．所有菌种均贴标签，规程第３版操作［引，以大肠艾希氏菌ＡＴＣＣ２５９２２、均分３管，后２种方法于＂２０℃保存．

金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３、铜绿假单胞菌（２）菌种的复活半固体琼脂法和细菌湿种牛ＡＴＣＣ２７８５３、肺炎克雷伯菌ＡＴＣＣ７００６０３为质控奶冻存法分别用接种针、接种环挑取培养物接种于菌株．营养琼脂平板．纸片法用灭菌镊子取蘸有菌株的纸１．２实验材料片，在营养琼脂平板上轻轻涂抹，用接种环三区划

（１）丰固体培养基取１０ｇ蛋白胨、５ｇ牛肉线．所有细菌均置于３５℃孵育１８ｈ，观察结果，分别膏、５ｇ氯化钠、２．５ｇ琼脂粉、加１０００ｍＬ蒸馏水，计算两种方法保存３个月、１２个月和３６个月后的加热溶解，调节ｐＨ为７．４，每管分装２．０ｍＬ，细菌存活率．、

１２１℃高压灭菌２０ｒａｉｎ，４℃冰箱保存备用．（３）统计分析数据用ＳＰＳｓ１３一Ｏ进行统计，

（２）细茵湿种牛奶冻存培养基ｌＯＯｍＬ蒸馏用Ｘ２进行组间分析，Ｐ＜０．０５表示有明显差异．

水加１５ｇ脱脂奶粉，加热溶解，调节ｐＨ为７．４，冻

存管每管１．０ｍＬ，１２１℃高压灭菌８ｒａｉｎ，４℃保存２实验结果

备用．随着菌株保存时间的延长，菌株存活率明显下

（３）纸片滤纸片剪成４ｍｍ×１０ｍｍ，置铝盒降，保存１２个月明显低于１个月，保存３６个月明显中，１２１℃高压灭菌２０ｍｉｎ．将小镊子及１．５ｍＬ带低于１２个月，纸片法保存细菌存活率明显高于半固盖塑料离心管高压灭菌后备用．体琼脂法（见表１）．进一步细分发现，纸片法保存铜１．３实验方法绿假单胞菌、白色假丝酵母茵３６个月后，菌株存活

（１）菌种保存①半固体琼脂法：用接种针挑达１００％，常见革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、凝固取纯培养细菌穿刺接种于半固体培养基，３５℃温箱酶阴性葡萄球菌和常见革兰氏阴性菌大肠艾希氏孵育１８ｈ后，于４℃保存Ｉ②细菌湿种牛奶冻存菌、肺炎克雷伯菌保存３６个月后，菌株存活率均＞法：接种环刮取纯培养１８ｈ后的菌苔２～３环于湿６８％，但均明显优于半固体琼脂法（见表２）．纸片法种牛奶冻存培养基中并混匀，盖紧塑料盖并封口［四； …… 此处隐藏：2040字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……