北方地区拟南芥栽培技术及基因转化体系的构擅

北方地区拟南芥栽培技术及基因转化体系.

摘要：从基质的配制、播种方法、栽培管

高的苔生叶上方减去苔的顶端，使此生花序长 (剪去整勿

个苔，因腋生花序北方南芥的栽培拟南芥化栽培建技术及基生因转未展开时 (系4~7d内侧)于转基因试地区技术和基因转体系的构方法进侧枝，长至花蕾的芽位于苔生叶柄的 )可建出化体一般的构。当植株长拟即用理、基因转化及转化植株筛选等方面对北方地区 行了介绍 .旨在为拟南芥在北方种植和利用拟南芥展开植物的分子研究提供依据关键词：拟南芥：栽培技术；转化体系

验，转基因之前，使土壤吸足水分。

42转化液的准备。接种农杆菌的阳性克隆于 l的 . 0mlY B培养基 (母提取物 1/蛋白胨 1/, Na 5 E酵 0g L, 0g L O

拟南芥 ( rbd pi tai a属十字花科植 A a io s l n) sh a物，又名鼠耳芥、阿拉伯芥、阿拉伯草。它具有植株小、每代时间短、结籽多、生活力强等特点，是研究有花植物的遗传、细胞、发育、分子

gL/,含 2 g的利福平， 10I/的卡那霉素，5 0 5￣/ ml 0 gml x 0 i/的庆大霉素，5t/的四环素) x ml g g￣ ml中，于 2 8℃培养过夜，按 l: 0的比例转接于 2 0ml同的 YE 5 0相 P培养基中扩

大培养至 0 D为 1 . 2~1,500g离心 1 n . 0 6 5mi,收集菌

生物学的模式植物，被誉为植物界的“果蝇”。现在发现的拟南芥生态型共有 70多个，其中最 5常用的三种是 ) C l￣ba、 o￣/#

体。菌体重悬于渗入缓冲液(渗入缓冲液配方 5%蔗糖，00%的 Sle .7,调 o 0至 0。 . 5 i t 7) w L D6 ( 1 . 8 43转化方法 .

( o) 1 s: w k; W ) C 1、 4 se sp￣ s,其中 C l生态型用： T a ( o于拟南芥的全基因组测序。为了充分发挥这一模一

431真空抽滤法。将待转化植株倒置在盛有农杆菌菌液的 . .容器上方，并使全部花序和叶片浸没于菌液中，抽真空至拟

式植物的优点，掌握拟南芥在北方地区的培养技

南芥叶片上出现气泡

,保持压 1 n 0mi。缓慢放气，重复 1 次，移出植株。转化后使植株横躺在托盘中，盖上保鲜膜以保持湿度，并盖上黑布黑暗处理。2 可将植株直立 2 4h后 2

术就显得非常重要。结合本地的试验条件和气候特点及实践经验，笔者着重在拟南芥的培养介质、播种方法、温湿度、光照条件及基因转化的常用方法等方面进行了概述。1栽培基质的配制

℃~2 5℃的光照条件使其正常生长。3~4周后，收获成熟种子，干燥条件保存备用。此方法的优点是转化率高，缺点是操作麻烦，需要特殊仪器。 43农杆菌浸渍法。将拟南芥培养钵 (端用封口膜加固， .2 .上 避免基质倒出)置于合适大小的烧杯或其他容器上，容器倒

为了保证提供充足的营养与良好的通气透水性，将蛭石、 炭土按 l:l的比例混匀，

l0℃高温灭荫 3h 8。将灭菌的基质装入花盆中，然后将花盆放入盛有清水的托盘中，待水渗透到土壤表面后，将托盘中的水倒掉。2拟南芥的播种

内装有转化液，使整个花序浸泡于菌液中 3 n~5mi,取出营养钵横躺在托盘中，用塑料薄膜保湿并暗处理 2,充足 4h浇水后将植株直立于 2 2℃~2 5℃的光照条件使其正常生长。3~4周后收获成熟种子，干燥条件保存备用。此方法

播种前低温 4℃处理 2~3d有助于种子萌 (发)由于拟南芥种子很小，一般采用蒸馏水悬。浮种子，牙签点播的方法播种。我们创新采用

的优点是转化率可观、操作简便，不需特殊仪器。43花器官喷洒法。2 0 -3 - 0 6年张森报导了一种更加简易的一转化方法，用含有 OD等于 O8的农杆菌， 5 .%蔗糖和 0 . 2 ml/面活性剂 sw t L表 i e L一7液体培养基喷洒正在发育的 l 7的花器官即可实现基因转化。植物生长到高约 4c时进行转 m化，此时植物具有大量的花和极少数的果荚，可以得到比较高的转化效率。喷洒溶液后将植物用保鲜膜等材料包裹起来以保持湿度，可有利于转化。此方法得到的转化效率和 D 法的转化率基本一致。5转

化檀株的筛选

01 .%的琼脂粉溶液悬浮拟南芥种子，用 20) 0 z l的移液枪配 2 0枪头(枪头剪掉 O m) 0 l将 . c反复吹吸几次， 5种子即可较均匀的悬浮且不沉降，调种子浓度为 1~3粒/ 滴，用移液枪播入花盆。每盘采用四周点播，中央一处的播种法，每点 1滴。播种后花盆覆保鲜膜，保持基质表面湿润，出苗后撤掉保鲜膜。播种后的花盆放入人：气候箱。工=3拟南芥的栽培管理

拟南芥不耐旱，应及时浇水。因为种子和幼苗太小，易被冲走，因此，采用托盘注水的方法补水。但托盘中不能留下积水，因为湿度太大会影响拟南芥生长，待基质表面潮湿后即可倒掉托盘中多余的水。每 3d补水 1。光照强度为 次 6~ 101 l s 0 0 mo m2。长光照： 1 ./ L 6h光照，8h黑暗 (殖生长生期)短光照： 8; 照， l暗 (养生长期 ) h光 6h黑营。参考前人的研究，温度设为昼 2 2℃、夜 l,相对湿度 7%。 8℃ 04拟南芥的基因转化

51种子表面消毒。首先用 7%的乙醇处理】 n . 0 mi,无菌水清洗 1次；然后用 o 5d,酸钠处理 5 n 2"'/￣氯 mi,无菌水清洗 3次。 5阳性转化植株的筛选。将拟南芥 F代转化种子进行表 - 2 1面消毒后均匀地播种 _含 5 g的 MS培养基平板上， f 0I/ x ml 在超净工作台中，将培养基表面的水分吹干，4℃处理 2d ,然后放置于温度为 2℃~2 0 3℃,光照强度为 6 0— 10 0

i l2 S￣/ ,连续光照条件下培养，约 l mo m周发芽。阳性转化

植株子叶色深绿，生根并长出真叶：非转化植株则逐渐枯萎死亡；待转化植株长出 3~4片真叶移至土壤中，培养 2 d 0

41转化植株的处理。当顶生花序长成 3c左右时，在最 . m

4 7

北方地区拟南芥栽培技术及基因转化体系.

当今社会，传统教育面临着巨大的挑战，教

话，我们所有的想法、方案和设想都会化为灰烬。因此，” 在导入新课时，要根据该节课的教学目的，创设能激发学生学习兴趣的情境，以调动学生的求知欲。运用现代信息技

差耋 统教育带来了巨大

影响。利用多媒体技术对文本、声音、图形、图像、动画等进行综合处理，能充

术，收集网上资料，精心创设与课堂相吻合、生动有趣而又贴近学生生活的问题情境，充分调动学生学习的积极性，为整个课堂的教学工作做好铺垫。例如，在讲解数学教学中的

‘乏 分造一图并、声色生逼的， 创出个文茂有有、动真教学环境。一方面为教师顺利进行教学工作提供

“打折”问题时，可以利用多媒体设计一组组画面：在商场门口的大条幅上标明，“国庆节全场一律九折”“司迎、波登羽绒服反季节销售，八折出售”等，并设计人头簇拥的抢购场面，接下来进入到有关利润问题的讲解。通过创设这种

鍪萎；f教的调式使学到处多体术厅育单模，乐落实。媒技的出现为教学手段的改进提供了新的可能，产生了不可估量的教学效果。1图形运转问题直观

问题情境，可以让学生感受到数学来源于生活，同时又服务于生活，同时感受到数学的实用性，使其积极主动地投入到学习中。3培养学生的观察和分析能力

翰

格、内烁、同步解说、色彩变幻等，从而多层次多角度表达教学内容。例如，在平面几何中讲解三角形全等的有关知识时，可制作一个课件，满

利多体术可实图的动定用媒技，以现形移、

学生观察、分析能力的培养是数学教学工作的主要任

务，贯穿于教学的各个环节。现代教学媒体可以使训练的形式更加具体、生动和形象，更能吸引学生，调动学生的思

足全等条件的两个或 …… 此处隐藏：3889字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……