大鼠腹部开放伤海水浸泡后胃黏膜氨基己糖和磷脂的变化（一）

大鼠腹部开放伤海水浸泡后胃黏膜氨基己糖和磷脂的变化(一) 作者：朱雄伟施文兴湛先保王强仇明胡志前李兆申

【摘要】目的：探讨大鼠腹部开放伤后海水浸泡的胃黏膜中氨基己糖和磷脂的改变。方法：32只SD大鼠随机分成正常对照组和腹腔浸泡伤1h、2h、3h4组，分别取相应大鼠的胃黏膜，采用化学比色法和改良抗坏血酸法测定胃黏膜中氨基己糖和磷脂含量。结果：与正常组大鼠相比，腹腔浸泡伤组大鼠胃黏膜氨基己糖和磷脂随着浸泡时间的延长而进行性减低（P＜0.05）,并在3h时达最低。结论：海水浸泡伤是一损伤性因素，通过减低胃黏膜中氨基己糖和磷脂含量而损害腹腔浸泡伤的大鼠胃黏膜屏障。

【关键词】海水?腹部损伤?胃粘膜?氨基己糖?磷脂类?大鼠，Spragedawley

Thechangesofhexosamineandphospholipidsingastricmucosaofratswithseawaterimmersionafteropenabdominaltrauma 【

ABSTRACT

】

Objective:Toexplorethechangesofhexosamineandphospholipidsingastricmucosaofratswithopenabdominaltraumaafterseawaterimmersion.Methods:Thirtytworatswererandomlydividedintofourgroups(normalcontrolgroup,celiacseawaterimmersingtraumastress1,2,3hgroups).Theamountofhexosamineandphospholipidsingastricmucosaofratsweredetectedbybothchemochromometricandmodifiedchemicalmethods.Results:Comparedwithnormalrats,b

othhexosamineandphospholipidsingastricmucosaofratsunderceliacseawaterimmersingtraumaareprogressivelydecreased(P0.05),especiallyinstress3hgroup.Conclusion:Seawaterimmersingtraumaisaharmfulfactor,itdeterioratesgastricmucosalbarrierinratswithopenabdominaltraumaafterseawaterimmersionthroughloweringthecontentofhexosamineandphospholipids. 【KEYWORDS】Seawater?Abdominalinjuries?Gastricmucosa?Phospholipid?

Rats,Spraguedawley

急性胃黏膜病变

（acutegastricmucosallesion,AGML）是创伤后最为常见的内脏并发症之一，一旦合并大量出血，处理非常困难，死亡率高，严重威胁病人的生命。在现代海战和渡海登陆战争中，由于特殊的战争环境，海水进入受伤开放性腹腔内的情况会时有发生。我们以前的实验〔1〕证实，海水浸泡伤后胃黏膜可发生AGML。本实验检测了AGML磷脂和氨基己糖的改变，为海水浸泡伤的早期综合救治提供新的思路。 1材料与方法 1.1材料

1.1.1动物分组和模型制作SD大鼠（第二军医大学动物中心提供）32只，体重200~300g，清洁级，雌雄各半，随机分为4组：0h组（正常组），腹腔开放伤浸泡人工海水组分为1h、2h、3h3组。模型制作参照文献〔1〕进行。为消除生物节律对实验结果的影响，均于上午8时开始实验。造模前禁食24h，自由饮水，实验前1h禁水。

1.1.2实验仪器台式低温高速冷冻离心机、DHG9070型电热恒温鼓风干

燥箱、水浴锅、822型恒温磁力搅拌器、UV754型紫外可见光光度计、煮沸锅、XHF1型高速组织匀浆器、震荡器。 1.2主要试剂

1.2.1人工海水配置根据国家海洋局第三研究所提供的配方配置，主要指标：渗透浓度（1250±11.52）mmol/L,pH8.2,Na+浓度（630±5.33）mmol/L,K+浓度（10.88±0.68）mmol/L，Cl1浓度为（658.8±5.25）mmol/L,温度（21±2）℃。

1.2.2试剂1.0mg/ml标准牛血清蛋白溶液，蛋白染色液，2mol/L的Na2CO3,40ml/L乙酰丙酮溶液，0.1mg/ml的盐酸氨基葡萄糖标准液，对二甲氨基苯甲醛试剂。8.0ml/L盐酸溶液，8.3mol/L的NaOH溶液，抽提液，消化剂，显色剂，1mg/ml磷贮存液，0.04mg/ml磷应用液。 1.3胃黏膜中氨基己糖和磷脂的测定

1.3.1胃黏膜标本的制备用玻片将新鲜腺胃部胃黏膜组织轻轻刮下，低温冷冻后称重，取1/2置于2ml生理盐水中，研碎成匀浆，离心取上清液，分别用于测定蛋白和磷脂、氨基己糖。

1.3.2考马斯亮蓝G250染色法制作蛋白标准曲线。按表1操作，室温放置15min后于595nm处比色测定，每组重复3次测定标本中蛋白含量。表1考马斯亮蓝G250染色法测定蛋白含量

1.3.3大鼠胃黏膜中氨基己糖含量测定参照冯敬池等〔2〕报道的方法进行。氨基己糖（μg/mg蛋白）=匀浆上清液氨基己糖（μg/L）/蛋白质浓度（mg/L）。精密称取105℃干燥恒重的盐酸氨基葡萄糖50mg溶解于

500ml去离子水中配置成0.1mg/ml的盐酸氨基葡萄糖标准液。制备标准曲线：在试管中分别加入0.1mg/ml的盐酸氨基葡萄糖标准液0.25,0.5,0.75,1.0,1.25ml，分别加水至2.5ml，加乙酰丙酮0.5ml，置沸水浴25min，冷水中迅速冷却，各加无醛乙醇1.5ml及对二甲氮基苯醛0.5ml，震荡，置60℃水浴保温1h，空白用2.5ml去离子水代替标准样品液，530nm波长处测定OD值。

1.3.4海水浸泡伤大鼠胃黏膜中磷脂含量测定取0.1ml黏液匀浆液加入磨砂口刻度试管中，加无水乙醇乙醚提取液2.4ml，取1ml上清液加入15mm×150mm试管中，在沸水浴上将溶剂蒸发至干，加消化液0.2ml。另外取两管作为空白管和标准管，空白管加去离子水，标准管加磷应用液0.1ml，分别加入消化液0.2ml。震荡器剧烈快速振摇3min，室温下放置10min后离心2000r/min×15min，将3管都放在铁丝架上，直接在1000W电炉上加热5~8min，见测定管内颜色先变棕黑色后变澄清时即可从电炉上取下，冷却后各管内加入显色剂2ml，60~70℃水浴10min（37℃需要2h显色完全），冷却后在700nm闭塞测定OD值。