动物细胞工程课堂笔记

动物细胞工程课堂笔记

动物细胞工程常用的技术

? 动物细胞培养：是其他动物细胞工程技术的基础。 ? 动物细胞融合 ? 动物细胞核移植

? 生产单克隆抗体等

? 一.动物细胞培养

(一)概念

（二）、原理：

? 如何进行细胞培养?

（三）相关概念

1.细胞贴壁：培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.

2.细胞接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。

3.原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内

1

的细胞称为原代细胞培养。

4.传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

5.细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 6.细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

7.细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 思考题：

1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？

2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？

3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？

4、细胞膜的主要成份是什么？

5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？

6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？

7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？

（四）、动物细胞培养的条件 1、无菌、无毒的环境

添加一定量的抗生素，定期更换培养液 2、营养

添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。 3、温度和PH

培养室中控制,使之达到 36.5 ± 0.5℃, 7.2~7.4 4、气体环境：

培养箱中提供O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） （五）、动物细胞培养技术的应用

（1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植 （2） 基因工程的受体细胞

（3）细胞的生理、药理、病理研究

植物组织培养和动物细胞培养的比较：见三维设计

2

P44旁栏

1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？

用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？

提示：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 二、动物细胞核移植 （一）概念：

克隆动物：用核移植的方法得到的动物。 （二）、分类：

胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性困难 克隆动物:用核移植方法得到的动物.

克隆（clone）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是“小树枝叶”的意思，用以指无性增殖物。 (三)、体细胞核移植的过程： 思考：

1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？

2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？

过程：

P49讨论：

1. 在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？

3

2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？

答：培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞 遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。

3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？

绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。 （四）、体细胞核移植技术的应用前景 1、 2、 3、 4、 （五）、体细胞核移植技术存在的问题

思考与探究

1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？

答：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。

2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？

动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为 30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般 为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4 t。

（1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。

可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良

4

进程。

该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出现近亲繁殖而引起种质衰退。

（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？

从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺 …… 此处隐藏：2605字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……