分子生物学习题集答案 - 图文(2)

特征：①新生正链与亲本正链总是连在一起；②滚环复制的DNA图形看似“?”字母；③前导链的启动不需要引物，也不需要转录激活，直接在3’—OH端切口上启动复制，整个复制过程只有一个复制叉（单项复制）。

7.研究表明小麦成熟胚，未成熟幼胚，幼嫩花序，叶片细胞中端粒DNA的长度分别为30 kb，80kb, 45kb, 23kb。请讨论这一研究结果的分子生物学机理。（8分）

随着组织、细胞的老化，染色体端粒DNA的长度逐渐缩短。 真核生物发育终端的体细胞中端粒酶基因表达如果受到抑制，将会导致体细胞中染色体DNA一代一代的短缩，当短缩至一个重要的信号序列处，就会引起细胞的早衰或死亡。

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8.某一质粒载体具有 Tet和 Kan的表型，（四环素和卡那霉素）在 Kan抗性基因内有一Bgl Ⅰ的切点。现用Bgl Ⅰ切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插人片段的重组体? 1>转化后涂皿时应加四环素。（用Bgl Ⅰ切割该载体，破坏了Kan抗性基因。） 2>培养后长出的菌落具有Tetr Kans和Tetr Kanr的抗性基因型。

3>重新点种在含四环素和卡那霉素的平板上，然后点种在只含四环素的平板上，选择只在四环素平板上生长的菌落（能在四环素平板上生长而不能再含四环素和卡那霉素的平板上生长的菌落），即为所需的重组体（Tetr Kans）。

第四章

二、 问答题:

1 概括典型原核生物启动子的结构和功能，并解释什么是保守序列。 原核生物启动子：上游控制元件（UCE）+核心启动子=扩展的启动子

UCE:即-40～-70区,能与CAP-cAMP复合物结合，是激活转录的正调控位点。 核心启动子：①-35区：Sextama盒，是RNA聚合酶首先识别和结合的位点（R site），或松弛结合位点。保守序列TTGACA,保守序列突变影响?因子结合效率； ②-10区：Pribnow盒，是RNA聚合酶随后滑到区域的结合位点（B site）,或紧密结合位点。保守序列TATAAT,保守序列突变影响开放复合物形成的速度，富含AT，解链发生区；③+1位点：转录起始点（I site），几乎均为嘌呤（A或P）。④-35区和-10区间有17±1bp的间隔序列，其保守性有利于RNA聚合酶的启动，保证了-35区和-10区能与?因子同时作用，为RNA转录提供恒定DNA双链解链区间，17bp的间距较17bp的序列对转录更为重要，间距的突变趋近17bp时，表现为上调突变，远离17bp时，表现为下调突变。启动子序列与-35区序列为TTGACA及-10区序列为TATAAT的标准启动子序列同源性程度的大小决定了启动子的强弱。

保守序列：指DNA分子中的一个核苷酸片段或者蛋白质中的氨基酸片段，它们在进

化过程中基本保持不变。这些序列高度相似，却来自不同的物种或同一生物体产生的不同分子。从跨种保留的角度来看，这种序列的存在意味着在形成不同物种的进化过程中，有一段特殊的基因序列被保留了下来。

2.简述原核生物RNA聚合酶全酶的组成以及各个亚基的功能。

RNA聚合酶全酶：5个亚基，?、?、?、?'和?，依靠空间结构专一性与特异性地与DNA结合。 ①?亚基：结合核心酶启动转录后脱离核心酶，使核心酶促延伸。可重复使用； 使全酶识别Sextama Box（R位点）、Pribnow(B位点),选择并紧密与模板链发生特异性结合，保证了相对较高的转录效率；

修饰RNA聚合酶的构型：降低全酶与DNA的非专一性结合力，增强全酶与R, B site的专一性结合力，导致RNA链的延伸缓慢； ②?亚基：核心酶的组建因子；

促使RNApol与DNA 模板链上游转录因子结合； 位于前端的α因子使双链解链为单链； 位于尾端的α因子使单链新聚合为双链。

③?亚基：促使RNA聚合酶聚合NTP，合成RNA链，使转录延伸；

完成 NMP之间的磷酸脂键的连接； 与RNA编辑有关；

与 Rho(ρ)因子竞争RNA 3’-end；

构成全酶后，β因子含有两个位点：起始位点（I）对利福平敏感，只专一性与ATP/GTP结合，决定了RNA的第一个核苷酸为A或G,延伸位点（E），对利福平不敏感，对NTP没有专一性，保证了RNA的延伸。

'? ④亚基：强碱性亚基；

促使RNA聚合酶与非模板链结合； 受K酶抑制。

3.原核生物与真核生物的mRNA的各有什么特点?

原核生物mRNA的特点为:1>半衰期短。原核生物中，mRNA的转录和翻译是在同一个细胞空间里同步进行的，蛋白质合成往往在mRNA刚开始转录时就被引发了。2>许多以多顺反子的形式存在。原核细胞的mRNA(包括病毒)有时可以同时编码几个多肽。3>原核生物mRNA的5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的多聚A结构,原核生物起始密码子AUG上游有一被称为Ribosome Binding Site (RBS)或SD序列（Shine –Dalgarno sequence）的保守区，因为该序列与16S-rRNA 3’端反向互补，所以被认为在核糖体-mRNA的结合过程中起作用4>原核生物常以AUG（有时GUG，甚至UUG）作为起始密码子; 真核生物mRNA的特点为：1>真核细胞mRNA的合成和功能表达发生在不同的空间和时间范畴内。mRNA以较大分子量的前体RNA出现在核内，只有成熟的、相对分子质量明显变小并经化学修饰的mRNA才能进入细胞质，参与蛋白质的合成。2>以单顺反子形式存在 。3>真核生物mRNA的5’端存在帽子结构，除组蛋白基因外，真核生物mRNA的3’端具有多聚A结构，真核生物的mRNA中，由DNA转录生成的原始转录产物-----前体mRNA，要经过5’加“帽”和3’酶切加多聚腺苷酸，再经过RNA的剪接，编码蛋白质的外显子部分就连接成为一个连续的可译框，通过核孔进入细胞质，作为蛋白质合成的模板。真核生物的mRNA还可以通过RNA编辑在初级转录物上增加、删除或取代某些核苷酸而改变遗传信。４＞真核生物几乎永远以AUG作为起始密码子。

4.β-地中海贫血症患者不能合成β-球蛋白。将患者与正常人β-球蛋白基因的DNA序列进行比较分析发现，除第一个intron中有一个碱基发生了改变外，所有序列相同，但其mRNA分子比正常人多出约100多个核苷酸。根据这一结果，说明患者缺失β-球蛋白的原因。

第一个intron中有一个碱基发生了改变，使得RNA加工过程中，对内含子的识别和剪接出现错误，剪接不完全，导致成熟mRNA比正常mRNA核苷酸多，编码蛋白质时可能对密码子的识别出现错位，也可能编码的蛋白质无法形成正常β-球蛋白的空间构像等，最后使患者缺失β-球蛋白。

5 说明研究两个已知蛋白质间相互作用关系的酵母双杂交技术的分子生物学原理。

很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结

合域（DNA-binding domain，BD）与转录激活域（Transcriptional activation domain ，AD）。这两个结构域各具功能，互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。不同来源激活因子的BD区与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。基于这个原理，可将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知 …… 此处隐藏：4758字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……