生化试验思考题总结

Shaonanlee 黑暗舞者DID

生化实验思考题总结

1. 蛋白质定量测量的方法有哪些？简要说明其原理。

答：a.紫外吸收，在280nm处有最大吸收峰。

b.定氮法，利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。

c.分光光度计法，利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。显色剂为考蓝。 d.双缩脲法。也是利用显色反应。 e.Folin酚法。

2. 如果凝胶过滤层析分离的蛋白质样品中含有多种蛋白质，在各蛋白质分子量已知的情况下，如何判断哪一种蛋白质时所想要的？

答：现在假设有三种蛋白质a b c，分子质量a>b>c。

那么，a最先流出，在体积V1处有一个洗脱体积，对应的a的溶液浓度在 V1处也最高，就会有一个OD值的峰值。b c同理。由不同的OD峰值， 对应不同的洗脱体积，就可以筛选出想要的蛋白质。如果想要b，那么在第 二个吸收峰的时候，找到相应的洗脱体积，然后在其附近的所接到的溶液 进行选取。就会得到想要的蛋白质。

3. 如果盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳，对其结果有何影响？

答：如果没有去除清蛋白里面的盐分，则会使电泳速度下降。原因在于溶液离子 强度太大，蛋白质表面的电荷减少，所以导致电泳速度下降，甚至无法泳动。

4. 对电泳所得的结果如何进行定量分析？

答：将电泳完毕的样品（凝胶），按条带宽度的分布剪下，分别把每个小块样品

用NaOH溶液漂洗，再将漂洗过的溶液进行OD值的测量。

Shaonanlee 黑暗舞者DID

5. 使SDS-PAGE具有高分辨率的三个因素是什么？

答：浓缩效应。电荷效应。分子筛效应。

6. 实验所得的各点数据中，哪些易出现较大的误差？

答：有两个点。第一个，在三十秒的点，反应速度太快，时间如果掌握不准，容易

出现误差。另一个，在3min的点，反应速度很慢，斜率小，则倒数大，所以 时间掌握不好，也容易出现大误差。

7. 假如把碱性磷酸酶对底物的亲和力提高十倍，实验方案该如何修改？

答：把底物和酶的浓度都降低。

8. 请举出三种提取质粒的方法，并简要说明其中一种方法的原理。

答：碱裂解（要求原理，书上有）；一步法（见书上46，47页有关TELT试剂的内容）

；SDS法；煮沸法。

9. 分析质粒DNA切割不完全的原因。

答：a.质粒因素：碱裂解时间太长，无法复性；乙醇挥发不完全，影响酶的活性。

b.酶的因素：酶的浓度太高或者太低。或者酶的活性降低。

c.酶切体系：温度不是最适温度；时间不够长；缓冲溶液的问题。

10. 分析酶切后没有观察到目的DNA的原因。

答：a.重组失败。

b.酶切失败。

c.目的基因量太少。

11. 从哪些方面可预防PCR出现假阳性结果？

答：假阳性就是出现了不该出现的条带。

a. 防止污染，例如模板的污染。 b. 引物设计合适，保证特异性。 c. 控制反应条件。

d. 必要时，要减少循环次数。